外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles,，EVs），其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液,、唾液、尿液,、乳汁等,，同時(shí)也存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡(jiǎn)述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,，經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,，混勻，置于冰上,。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程,，包括除雜、濾膜過(guò)濾,、超離等,。較后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）,、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。外泌體的提取分離：超濾離心。重慶正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體（exosomes）是活細(xì)胞經(jīng)過(guò)"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過(guò)程而形成的膜性囊泡,，來(lái)源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),，直徑約為30-150nm，密度在1.13-1.21g/ml,，天然存在于血液,、唾液、尿液及母乳等體液中,，同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中,。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體，人體中大約有1014個(gè)外泌體,，大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè),。外泌體中含有核酸（DNA、miRNA,、lncRNA,、mRNA、tRF等）,、蛋白和脂類,，在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，研究表明其在干細(xì)胞,、免疫調(diào)控,、瘤轉(zhuǎn)移,、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用重慶正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng)，無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。

功能：當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源,、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸,、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型,，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化,、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來(lái)源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,，促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí),，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題,。三是密度梯度離心法,，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,，耗時(shí),，量少。,、外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及。

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml,，具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液,、尿液,、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞（免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),，都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA，Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,，也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA、miRNA,、lncRNA,、circRNA，甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,，參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,，不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病,。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,，它可以通過(guò)外泌體從一個(gè)地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個(gè)地方行使基因沉默功能。通過(guò)檢測(cè)外泌體中miRNA表達(dá)變化,，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能外泌體提?。和ㄟ^(guò)色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，這可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu),。杭州外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,，參與細(xì)胞間通訊。重慶正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體的提取、分離方法：梯度密度離心法,。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此,，可以采用密度梯度離心法來(lái)分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合，原理是先除去非囊泡物質(zhì),，再通過(guò)梯度密度濃縮提取外泌體,，該方法可以得到相對(duì)較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此,，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時(shí)間不充足，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,，特別是這個(gè)密度范圍又比較寬,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家