膠原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,，而引起纖維膨脹,、溶解。作為溶劑使用的酸,，主要有鹽酸或亞硫酸,、磷酸,、硫酸、醋酸,、檸檬酸和甲酸等,。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu),。此法處理快速,，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備,，但產(chǎn)品得率低,，設(shè)備腐蝕嚴(yán)重，污染重,。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白,，得到高純度的膠原蛋白溶液。加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。金華鼠尾膠原

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻,，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6）使用時,，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。合肥珠海鼠尾膠原膠原蛋白按其應(yīng)用可以分為食品級,、一般級、醫(yī)藥級,。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞,。也可用于制備三維膠,，模擬真實的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長,。1,，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長,、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長,。使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。

要準(zhǔn)備的器具：組織剪2把,，有齒鑷1把,，無齒鑷1把，200ml燒杯1個,，培養(yǎng)皿1個,，帶蓋廣口瓶1個，離心管,、小瓶數(shù)個,，滴管若干,。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1％醋酸溶液,。經(jīng)44.48N10min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用,。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液。取大鼠尾巴,，洗凈,，置75%酒精浸泡消毒后，手持尾巴,，用止血鉗夾住尾巴較高,，折斷尾骨后拉出尾腱，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中,，稱尾腱的重量,，按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液，搖晃,，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置48小時，離心,。吸取其上清,，分裝至小瓶，4℃保存,。上述制備過程均在無菌條件下完成,。它可以用于監(jiān)測小鼠血液成分的變化，確糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等,。青島鼠尾膠原哪家便宜

制備鼠尾膠原（兩個同學(xué)一組操作）,。金華鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上，pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液（均需要無菌,、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH,，0.1mol/L乙酸(一般不用)，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。金華鼠尾膠原