外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高,、操作難度大,。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,,適用于細胞培養(yǎng)上清液,、血清、血漿,、尿液及其他體液(腦脊液,、腹水、羊水,、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,,可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當血清,、血漿,、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,,可用4℃預(yù)冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心,。3.針對外泌體標志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進行Westernblot檢測,可以鑒定所提的外泌體,。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。合肥外泌體提取試劑哪里買
外泌體(exosomes)是活細胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,,密度在1.13-1.21g/ml,,天然存在于血液、唾液,、尿液及母乳等體液中,,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,,人體中大約有1014個外泌體,,大約平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA,、miRNA,、lncRNA,、mRNA、tRF等),、蛋白和脂類,,在細胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細胞,、免疫調(diào)控,、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用天津正規(guī)外泌體提取試劑平均價格外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。
外泌體項目獲批學(xué)科方向:從統(tǒng)計來看,,與前年相似外泌體立項集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué),,近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成,耐藥性,,檢測等方面有關(guān),。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過TLR7/NFκB/c-My信號通路在女性食管ai中促進維持ai癥干細胞樣細胞的動態(tài)平衡。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運p-STAT3可促進結(jié)直腸ai細胞獲得性5-FU耐藥性,。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細胞外囊泡相關(guān)的miRNA作為子宮內(nèi)膜ai分子標志物的可能性,。此外,在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病,,中醫(yī)學(xué)及其他領(lǐng)域也有不少外泌體相關(guān)項目中標,。
PS不是你想有,想有就能有,,迄今為止所發(fā)現(xiàn)的外泌體,,并非所有的外膜表面都暴露PS。例如,,細菌來源的外泌體膜表面沒有PS,,因此,本款試劑不能提取這種外泌體?,F(xiàn)在的研究尚未得知是否所有的外泌體上都會露出PS,,但是上述的外泌體標記根據(jù)細胞種類不同表現(xiàn)出的信號強弱差大,通過利用本試劑盒PS親和法捕捉,、提取外泌體是較好的方法,。:這個MagCapture?ExosomeIsolationKitPS,1次提取的外泌體量大概是多少,?實驗樣品的種類和體積不同,,提取的外泌體量也不一樣。Wako的操作實例中,,一次提取操作可獲得蛋白量約30μg/mL(BCA法檢測),,粒子數(shù)1~2×1010(NanoSightLM10檢測)(經(jīng)莫能菌素鈉刺激外泌體分泌的K562培養(yǎng)上清5mL濃縮為1mL后,,對其進行提?。?。另外,和光驗證了從1mL正常人混合血清提取一次,,可回收約34μg/mL蛋白質(zhì)(BCA法檢測),,約5×109/mL的粒子數(shù)(NanoSightLM10檢測)。本試劑盒終可獲得100μL的洗脫液,。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。
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直接把外泌體從尿液中沉降下來,,無須分離培養(yǎng)人尿液來源細胞并收集培養(yǎng)基,。合肥外泌體提取試劑哪里買
用于外泌體提取的體液收集注意事項:1、選擇血清還是血漿,?推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過程中血小板會產(chǎn)生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,,選擇血漿可避免不必要的影響,。2,、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),,這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用,。除了克制PCR,肝素可以與外泌體結(jié)合,,阻止細胞攝取外泌體,。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達莫(CTAD),,CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體,。EDTA可能會干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),但是還是優(yōu)于其他選擇,。此外,,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量,。合肥外泌體提取試劑哪里買