由歐洲多國細(xì)胞外囊泡領(lǐng)域的學(xué)者發(fā)起并成立的國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(ISEV)于2014年在協(xié)會會刊JournalofExtracellularVesicles發(fā)表了一個(gè)指導(dǎo)性意見,,也就是我們常說的MISEV2014。2018版《指導(dǎo)要求》進(jìn)行了修訂,。2018版的《指導(dǎo)要求》首先討論了對這些細(xì)胞來源的非細(xì)胞具膜結(jié)構(gòu)如何稱呼,。學(xué)者們普遍認(rèn)為應(yīng)當(dāng)使用細(xì)胞外囊泡(extracellularvesicle)來稱呼這些具膜囊泡,當(dāng)我們使用常規(guī)方法分離這些結(jié)構(gòu)時(shí)不推薦使用其他的名稱來稱呼它們。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),。深圳正規(guī)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨
外泌體的提取、分離方法:超高速離心法,。常用的是超高速離心法,,該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。該方法利用離心力從細(xì)胞培養(yǎng)液或生物流體獲得外泌體,,經(jīng)過400×g,、2000×g,、10000×g的低速離心,,除去細(xì)胞及大的細(xì)胞分泌物;較后超高速100000×g離心得到外泌體[12],。超高速離心因操作簡單,,不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,并且成本相對較低而被普遍使用,。但是該方法耗時(shí),、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型,、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,,其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會有其他的囊泡,、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體,。上海正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)外泌體提取:超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,。
外泌體與肺病預(yù)后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,還有研究表明,,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物,。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,,其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),,let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。
由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),,另一方面也可以作為治病手段,,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題,,獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關(guān)重要,。據(jù)了解,目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠,、超濾、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離,。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子,、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),,在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。外泌體提取:磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)。
外泌體,,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,?;罴?xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA,、RNA,、以及miRNA)。貴陽外泌體提取試劑供應(yīng)商
也可以作為治病手段,,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病,。深圳正規(guī)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液,、尿液,、唾液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病深圳正規(guī)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨