鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加，一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,，制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提,、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟,，才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白。這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，可以用來當(dāng)作細胞培養(yǎng)的基質(zhì),。細胞培養(yǎng)過程中,，細胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面（懸浮培養(yǎng)細胞除外）才能完成生長過程，而有一些細胞卻總是不太給力,，自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,，這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層（coating）,，給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,，細胞就能更好地貼附上去，除了培養(yǎng)皿,，一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細胞,，同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細胞貼壁生長。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。南京正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

實驗應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性,，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉,。寧波南昌鼠尾膠原建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I,、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH,。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,，pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液（均需要無菌,、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一般不用),，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試),。鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì)。

含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。鼠尾膠原醋酸溶解：不要晃動或攪拌,。無錫正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

制備鼠尾膠原：重復(fù)步驟2、3,，直至尾腱量夠用,。南京正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積，混勻,，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6）使用時,，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。南京正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家