鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,,對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究,。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,,10,,100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),,應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),,流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率,,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá)。鼠尾膠原醋酸溶解:制備成濃度為0.1%的溶液,。長沙鼠尾膠原哪家便宜
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,,各種醫(yī)用耗材的更新?lián)Q代也是日新月異。止血材料是常見的醫(yī)療器械產(chǎn)品,。但是現(xiàn)今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點(diǎn),;同時還存在著容易與傷口粘附不易去除,導(dǎo)致傷口潰爛,,或者因為粘附導(dǎo)致傳染,;再次就是止血材料多是通過吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血,很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質(zhì)的材料來生產(chǎn)的?,F(xiàn)今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素,、α-氰基丙烯酸酯類組織膠、醫(yī)用止血明膠等,,但是都有各自的缺點(diǎn),。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高;α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過程中釋放出氰和甲醛等有毒物質(zhì),;醫(yī)用止血明膠黏附性較差,,易脫落,因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等,。合肥天津鼠尾膠原可用于制備三維膠原凝膠,,使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長。
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I,、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH,。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4)在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL),。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,,混勻,,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6)使用時,,無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明:不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試),。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。制備鼠尾膠原:吸取上清,分裝成小瓶,,4℃保存,。
一種基于鼠尾膠原蛋白:1.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,其特征在于凍干止血材料中,,各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%,,余量的水。2.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,,其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾,。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,其特征在于劑型為創(chuàng)可貼,。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,,其特征在于劑型為噴霧劑,。4°C沉淀10小時,,去除上清液,,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀,。長沙鼠尾膠原哪家便宜
一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,。長沙鼠尾膠原哪家便宜
鼠尾膠原:鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑。實驗設(shè)備及材料:大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平,、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實驗內(nèi)容:1、制備鼠尾膠原(兩個同學(xué)一組操作),。2,、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,,75%酒精浸泡5分鐘,;2、手持尾巴,,用止血鉗夾住鼠尾的,,折斷尾骨后拉出尾腱;3,、將尾腱剪斷置于平皿中,,生理鹽水浸泡;4,、重復(fù)步驟2,、3,,直至尾腱量夠用;5,、吸去生理鹽水,,將尾腱稱重(0.5-1克);6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,,轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中;7,、按每克尾腱50ml的比例,,加入0.1%醋酸溶液;8,、搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期,;9,、離心,4000轉(zhuǎn)/分,,10-15分鐘,;10、吸取上清,,分裝成小瓶,,4℃保存。長沙鼠尾膠原哪家便宜