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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-01

鼠尾膠原的提取步驟:配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液(用鹽酸將其PH值調(diào)至7.5) 取鼠尾,,去皮,,由尖部向前分段抽取肌腱,置于生理鹽水中,,稱重,,再倒掉生理鹽水,酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液,,(1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心,,(8000rpm 5min) 其上清,留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中,,用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物,,加入消毒過(guò)的攪拌 子,冷房攪拌數(shù)天,,得絮狀膠原,。 注意所有和膠原有關(guān)的操作都在冰上進(jìn)行\(zhòng) Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液(用鹽酸將其pH值調(diào)至7.5); 于-20冰箱中取出鼠尾,,浸泡75%或70%酒精,,解凍; 在一小培養(yǎng)皿中放置少量生理鹽水,,置于電子秤上,,調(diào)零,; 取鼠尾,去皮,,由尖部向前分段抽取肌腱,,置于生理鹽水中。免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。廈門(mén)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

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鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明:含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,,并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻,。再加入23ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,,并且制作簡(jiǎn)便,,成本低廉,。珠海正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)在2-8度中放置過(guò)夜,。在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。

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鼠尾膠原蛋白的用途是什么:在工業(yè)應(yīng)用方面,,鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的內(nèi)部涂層,。設(shè)備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥,。它還可以用來(lái)制造一種凝膠,可當(dāng)作懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基,。此外,,還可以把它當(dāng)膠水使用。在化妝品行業(yè),,鼠尾膠原蛋白可當(dāng)作沐浴液和肥皂中的凝膠,。它還用于生產(chǎn)能減少皺紋和改善皮膚質(zhì)量的面霜或護(hù)膚霜。不過(guò),,用于撫紋,,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從?;蜇i提取。不過(guò),,用于撫紋,,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從牛或豬提取,。

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,,pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,,在成膠過(guò)程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和,。需要的溶液 ( 均需要 無(wú)菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過(guò)夜。

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鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,,并且均用0,10,,100μmol/L H2O2誘導(dǎo),。24 h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),,應(yīng)用MTT 比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,,TUNEL 法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,,硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,Western-Blot 檢測(cè)凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá),??捎糜谥苽淙S膠原凝膠,使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng),。成都鼠尾膠原直銷廠家

制備鼠尾膠原:搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期,。廈門(mén)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I,、無(wú)菌10×PBS、無(wú)菌蒸餾水,、無(wú)菌1M NaOH,。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3)在冰上放置無(wú)菌管以收存膠原蛋白I,。4)在無(wú)菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL),。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無(wú)菌冰冷1M NaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無(wú)菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10× PBS)—V(1M NaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積,,混勻,,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí),。6)使用時(shí),,無(wú)菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。廈門(mén)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

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