外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動(dòng)分泌的囊泡樣小體,,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來(lái)源普遍,,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,,在血液,尿液,,唾液,,腦脊液,腹水,,乳汁等體液中普遍分布,。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),,開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,。合肥正規(guī)外泌體提取試劑單價(jià)
在無(wú)菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進(jìn)行稀釋,,然后通過(guò)離心篩選初步去除體液中的細(xì)胞成分和細(xì)胞碎片,制成體液樣本備用,;體液樣本純化:通過(guò)過(guò)濾膜對(duì)上述體液樣本進(jìn)行過(guò)濾,,進(jìn)一步去除體液中的細(xì)胞殘片及其他雜質(zhì),靜置10~15分鐘,,留取沉淀物備用,;外泌體提取:將上述沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層,,然后用無(wú)菌針管吸取上層含有外泌體的液體,置于80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。此提取方法條件復(fù)雜,,成本高,專利申請(qǐng)利用靜置不太可能把外泌體沉降下來(lái),;根據(jù)外泌體表面的特異生物化學(xué)特性通過(guò)提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來(lái),。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。南京正規(guī)外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)外泌體提?。撼x法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行,。
外泌體研究的主要應(yīng)用:外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型,,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈,、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來(lái)源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲,。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移。來(lái)自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML)細(xì)胞的增殖,、遷移和壓制細(xì)胞凋亡。治病靶標(biāo),。利用外泌體遞送小干擾RNA來(lái)沉默KRASG12D,,從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,以明顯降低RAS活化,、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過(guò)程,。免疫。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,,并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞,,有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管,。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動(dòng)脈硬化,。分子標(biāo)記。疾病診斷,。在酒精性肝病,、NASH、菌類性肝炎,、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預(yù)后標(biāo)志。
外泌體的提取分離:1,、超濾離心,。由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡(jiǎn)單高效,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法,。2、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來(lái),。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實(shí)驗(yàn),,難以普遍普及。外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,,可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)。
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液、尿液,、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),,都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA、miRNA,、lncRNA,、circRNA,,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病離心除去細(xì)胞器,留取上清,。南京正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體的提取方法:超速離心法(差速離心),。合肥正規(guī)外泌體提取試劑單價(jià)
外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動(dòng)分泌的囊泡樣小體,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來(lái)源普遍,,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,,在血液,尿液,,唾液,,腦脊液,腹水,,乳汁等體液中普遍分布,。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),,開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。超離法因操作簡(jiǎn)單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎,但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),,且回收率不穩(wěn)定,,純度也受到質(zhì)疑。合肥正規(guī)外泌體提取試劑單價(jià)