外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實(shí)驗(yàn),,難以普遍普及,。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),,顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),,顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,。用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,,置于80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩o錫外泌體提取試劑價(jià)格
由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù),,穩(wěn)定性高,,不易降解,是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測的非常理想的新型生物標(biāo)記物一些疾病的早期診斷,、用藥監(jiān)控,、預(yù)后判斷。近年來,,隨著人們對外泌體的研究和認(rèn)識(shí)加深,,外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷、治病和監(jiān)測,;如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液,、唾液、腹水,、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的,,其是活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA,、RNA,、以及miRNA),在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用,。天津正規(guī)外泌體提取試劑平均價(jià)格外泌體的提取分離:超濾離心,。
可以,。為了能夠高效提取細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體,磁珠可重復(fù)使用5次(同一樣品),。試劑盒里的緩沖液含5次提取需要的量,。1mL體積以上細(xì)胞上清樣本建議進(jìn)行濃縮后再回收,提取時(shí)可進(jìn)行反復(fù)抽提,,提高提取效率,。用血液樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),需要根據(jù)磁珠狀況來判斷是否能重復(fù)利用,;若磁珠發(fā)生聚集,,利用渦旋儀也無法使磁珠分散,不建議繼續(xù)使用,。詳情參考操作說明書,。太好了,這樣實(shí)驗(yàn)成本瞬間就降下來了,,那樣品純化所需的比較低量是,?老師:使用旋轉(zhuǎn)器的需要500μL以上,使用離心管混合器的需要100μL,。樣品量更少的情況下加TBS到所需比較低量后再使用ExosomeCapture固定化磁珠,。同學(xué):電鏡分析需要外泌體的量是多少?
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒,、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,費(fèi)事費(fèi)力,,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細(xì)胞上清來說,,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,,濃縮管重復(fù)利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,,對于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響也可以作為治病手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病,。
在無菌條件下提取人體體液,,并用PBS緩沖液進(jìn)行稀釋,然后通過離心篩選初步去除體液中的細(xì)胞成分和細(xì)胞碎片,,制成體液樣本備用,;體液樣本純化:通過過濾膜對上述體液樣本進(jìn)行過濾,進(jìn)一步去除體液中的細(xì)胞殘片及其他雜質(zhì),,靜置10~15分鐘,,留取沉淀物備用;外泌體提?。簩⑸鲜龀恋砦镉肞BS緩沖液進(jìn)行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層,然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,,置于80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。此提取方法條件復(fù)雜,成本高,,專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來,;根據(jù)外泌體表面的特異生物化學(xué)特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。此提取方法條件復(fù)雜,成本高,。徐州外泌體提取試劑銷售廠家
外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),。無錫外泌體提取試劑價(jià)格
研究表明被特定部位的細(xì)胞獲取的一些病癥外泌體可為一些病癥的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境,。用肺轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達(dá)譜,,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),,而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,,進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移,。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后啟動(dòng)了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá),。較后通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測一些病癥轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo),。無錫外泌體提取試劑價(jià)格