三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌,、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻,。鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,。廈門南昌鼠尾膠原
為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA,,要從它們身上取下足量的細胞用于實驗。為了盡可能減少對動物的傷害和方便試驗人員的操作,,剪下一小段鼠尾是一個不錯的選擇。就讓我們來盤點一下「耗子尾汁」的三種用法↓↓↓鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴,、在小鼠尾靜脈上劃一道小口,、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的「耗子尾汁」。它可以用于監(jiān)測小鼠血液成分的變化,,確認小鼠是否患上了糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等,。比起心臟和眼部取血,實驗用鼠尾尖取血的取血量較小,,但取血之后,,小鼠還能繼續(xù)下一步建模或者實驗,,完全沒有性命之憂,。無錫重慶鼠尾膠原生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,,保持恒低溫無菌的環(huán)境,。
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:在工業(yè)應用方面,鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實驗室設備的內(nèi)部涂層,。設備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥,。它還可以用來制造一種凝膠,可當作懸浮細胞的培養(yǎng)基,。此外,,還可以把它當膠水使用。在化妝品行業(yè),,鼠尾膠原蛋白可當作沐浴液和肥皂中的凝膠,。它還用于生產(chǎn)能減少皺紋和改善皮膚質(zhì)量的面霜或護膚霜。不過,,用于撫紋,,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從牛或豬提取,。不過,,用于撫紋,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從牛或豬提取,。
鼠尾膠原:鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑,。實驗設備及材料:大鼠尾巴、剪刀,、鑷子,、止血鉗、彎頭吸管,、平皿,、三角燒瓶、燒杯,、量筒,、天平、生理鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆、鼠尾膠原,。實驗內(nèi)容:1,、制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。2,、切割小玻片,。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。制備鼠尾膠原:1,、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘,;2,、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的,,折斷尾骨后拉出尾腱,;3、將尾腱剪斷置于平皿中,,生理鹽水浸泡,;4、重復步驟2,、3,,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,,將尾腱稱重(0.5-1克),;6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,,轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,;7、按每克尾腱50ml的比例,,加入0.1%醋酸溶液,;8、搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,,4℃放置一星期;9,、離心,4000轉(zhuǎn)/分,,10-15分鐘,;10、吸取上清,,分裝成小瓶,,4℃保存。使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡,。
膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。在人的身體中這是皮膚、筋,、軟骨,、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì)。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一,,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,有脯氨酸和羥脯氨酸,。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別,,膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι,、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,即間質(zhì)膠原蛋白,。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,。膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同。無錫成都鼠尾膠原
鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。廈門南昌鼠尾膠原
含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,,并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,,混勻(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,,加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。廈門南昌鼠尾膠原