鼠尾膠原:含細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要測定pH值),。加入760μL的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,,加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠,,在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,,切勿凍存,,有效期一年。鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應(yīng)用,。杭州鼠尾膠原廠家供應(yīng)
除了讓細胞更好貼上去,,鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,這樣可以在培養(yǎng)皿中一定程度上模擬身體內(nèi)部的生長環(huán)境,,讓細胞在更真實地條件下進行生長,。當然,除了這些,,耗子尾汁還能做到很多事情,,只需要打開網(wǎng)站——知網(wǎng),,輸入鼠尾膠原蛋白就能看到,例如鼠尾膠原蛋白可用于制備防皺保濕或美白產(chǎn)品,,制作止血海綿敷料等各種用途,。NO.3鼠尾DNA除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料,。蘇州君欣生物科技有限公司鄭州正規(guī)鼠尾膠原廠家供應(yīng)鼠尾膠原,、多聚賴氨酸和明膠3種基質(zhì)對體外培養(yǎng)角膜上皮細胞增殖的影響。
為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA,,要從它們身上取下足量的細胞用于實驗,。為了盡可能減少對動物的傷害和方便試驗人員的操作,,剪下一小段鼠尾是一個不錯的選擇,。就讓我們來盤點一下「耗子尾汁」的三種用法↓↓↓鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口,、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的「耗子尾汁」,。它可以用于監(jiān)測小鼠血液成分的變化,確認小鼠是否患上了糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等,。比起心臟和眼部取血,,實驗用鼠尾尖取血的取血量較小,但取血之后,,小鼠還能繼續(xù)下一步建?;蛘邔嶒灒耆珱]有性命之憂,。
膠原蛋白的提取方法:酸法提?。核岱ㄌ崛≈饕捎玫碗x子濃度酸性條件浸漬處理原料,從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,,而引起纖維膨脹,、溶解。作為溶劑使用的酸,,主要有鹽酸或亞硫酸,、磷酸、硫酸,、醋酸,、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,,用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu),。此法處理快速,所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的,,適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備,,但產(chǎn)品得率低,,設(shè)備腐蝕嚴重,污染重,。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白,,得到高純度的膠原蛋白溶液。膠原蛋白(Collagen)是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,,使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻,。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I(rattailtendoncollagentypeI)根據(jù)Birkedal-Hansen方法,,經(jīng)過醋酸(HAc)抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。整個操作請于冰上進行,因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠,。南京正規(guī)鼠尾膠原單價
鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備,,純度達到95%以上。杭州鼠尾膠原廠家供應(yīng)
鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構(gòu)建,對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究,。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達,。結(jié)果與結(jié)論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細胞存活率及細胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細胞凋亡率及細胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性。杭州鼠尾膠原廠家供應(yīng)