鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,，對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用,。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實驗組）和普通培養(yǎng)皿（對照組）中,，并且均用0,，10，100μmol/LH2O2誘導,。24h后,，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài)，應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),，流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,，Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達,。建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。昆明正規(guī)鼠尾膠原產品介紹

含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結）,，立即混勻,。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。無錫正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷鼠尾型膠原構建與人類自體骨組織化學成分和分子結構相近的仿生骨材料,。

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提取：堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉,、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白,。由于它容易造成肽鍵水解,，因此得到的水解產物分子量比較低。所以,，若想保留膠原的三股螺旋結構,，此法不可取,。2.鹽法提取：鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl),、氯化鈉,、檸檬酸鹽等。在中性條件下,，當鹽的濃度達到一定量時,，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理,，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白,。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻,，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6）使用時,，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作,，避免污染以影響細胞生長。

除了讓細胞更好貼上去,，鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,，這樣可以在培養(yǎng)皿中一定程度上模擬身體內部的生長環(huán)境，讓細胞在更真實地條件下進行生長,。當然,，除了這些，耗子尾汁還能做到很多事情,，只需要打開網站——知網,，輸入鼠尾膠原蛋白就能看到,，例如鼠尾膠原蛋白可用于制備防皺保濕或美白產品，制作止血海綿敷料等各種用途,。NO.3鼠尾DNA除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,，老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。這類「耗子尾汁」通常用來鑒別耗子的基因型,，對于轉基因小鼠而言,，如果無法通過毛色來分辨動物的基因型，往往會選用經典的PCR法,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。長沙正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過濾的方法無菌化,。昆明正規(guī)鼠尾膠原產品介紹

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉移到培養(yǎng)箱內。如果配制中使用的是10PBS,，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡,。B．含細胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結）,，立即混勻,。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠,，在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rattailtendoncollagentypeI）根據Birkedal-Hansen方法，經過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得。昆明正規(guī)鼠尾膠原產品介紹