膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成,。在人的身體中這是皮膚,、筋、軟骨,、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質,。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一,,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,有脯氨酸和羥脯氨酸,。根據(jù)其遺傳分子結構遺傳基因的差別,,膠原蛋白分為20幾個亞型,。但較為常見的為Ι、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,,即間質膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質優(yōu)良,。除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。濟南正規(guī)鼠尾膠原報價
鼠尾膠原實驗應用:鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用,。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果:自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞,,細胞角蛋白18表達陽性,,免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,,并且制作簡便,成本低廉,。廣州鼠尾膠原單價可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,,培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,,模擬真實的生長環(huán)境,,使細胞在三維環(huán)境中生長。1,,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長,。1mg/ml濃度以上,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內正常生長,、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法:1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,,并且制作簡便,成本低廉,。
鼠尾膠原:含細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,,并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),,立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要測定pH值)。加入760μL的細胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,,轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫,。保存條件4℃保存,,切勿凍存,有效期一年,。鼠尾膠原醋酸溶解:將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,。
細胞培養(yǎng)過程中,細胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細胞除外)才能完成生長過程,,而有一些細胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用,。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,細胞就能更好地貼附上去,,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細胞,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細胞貼壁生長,。耗子尾汁還能變得更加,,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型,。昆明鼠尾膠原直銷廠家
一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,。濟南正規(guī)鼠尾膠原報價
鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察:果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色;礦化2d后,,膠體的顏色逐漸加深至乳白色,;礦化6d后,隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內部,,膠體顏色加深至純白色,,并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,予鑷子夾起,,其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落,。TEM表征顯示:礦化2d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結構逐漸模糊,,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內部,,膠原纖維部分礦化,沿著膠原纖維生長,,忖度變深,;礦化6d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結構完全消失,,膠原纖維內部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,,嵌入膠原纖維縱向生長。當鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時,,由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),,膠原纖維呈現(xiàn)黑色,選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征,。濟南正規(guī)鼠尾膠原報價