I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,,經(jīng)過乙酸抽提、離心,、滅菌,、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,,屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,,可用于包被細胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被),適合多種類型細胞的貼壁如肝臟細胞,、神經(jīng)節(jié)細胞,、胚胎細胞、肌細胞,、肺細胞,、神經(jīng)鞘細胞等。I型膠原蛋白包被細胞培養(yǎng)板,,規(guī)格為6/24孔板,,表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附,。使用這種細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞,,可以獲得良好的細胞貼壁率,細胞增殖速度快,,形態(tài)均一,,細胞培養(yǎng)成功率高。制備鼠尾膠原:將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,,轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,。廈門正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨
三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌,、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻,。廣州正規(guī)鼠尾膠原哪里買對于生物科研汪們來說,,大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻,。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,,加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I(rattailtendoncollagentypeI)根據(jù)Birkedal-Hansen方法,,經(jīng)過醋酸(HAc)抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。
一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液,;在冰水浴中,,調(diào)節(jié)pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,,4°C沉淀10小時,去除上清液,,去除上清液,,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀,;2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,,成透明澄清黏稠溶液,冰水浴中,,調(diào)節(jié)PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂,、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理;(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液,,-40至-20°C預(yù)凍2?4小時,,然后真空冷凍干燥,,凍干產(chǎn)品經(jīng)進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,滅菌,、包裝,,得到成品膠原蛋白粉末。利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。
膠原蛋白的提取方法:酸法提?。核岱ㄌ崛≈饕捎玫碗x子濃度酸性條件浸漬處理原料,從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,,而引起纖維膨脹,、溶解。作為溶劑使用的酸,,主要有鹽酸或亞硫酸,、磷酸、硫酸,、醋酸,、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,,用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu),。此法處理快速,所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的,,適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備,,但產(chǎn)品得率低,設(shè)備腐蝕嚴(yán)重,,污染重,。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白,得到高純度的膠原蛋白溶液,。結(jié)論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,。寧波正規(guī)鼠尾膠原哪家好
鼠尾膠原醋酸溶解:在2-8度中放置過夜。廈門正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨
除了讓細胞更好貼上去,,鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,,這樣可以在培養(yǎng)皿中一定程度上模擬身體內(nèi)部的生長環(huán)境,讓細胞在更真實地條件下進行生長,。當(dāng)然,,除了這些,耗子尾汁還能做到很多事情,,只需要打開網(wǎng)站——知網(wǎng),,輸入鼠尾膠原蛋白就能看到,例如鼠尾膠原蛋白可用于制備防皺保濕或美白產(chǎn)品,制作止血海綿敷料等各種用途,。NO.3鼠尾DNA除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。這類「耗子尾汁」通常用來鑒別耗子的基因型,,對于轉(zhuǎn)基因小鼠而言,,如果無法通過毛色來分辨動物的基因型,往往會選用經(jīng)典的PCR法,。廈門正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨