為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA,,要從它們身上取下足量的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。為了盡可能減少對(duì)動(dòng)物的傷害和方便試驗(yàn)人員的操作,,剪下一小段鼠尾是一個(gè)不錯(cuò)的選擇,。就讓我們來盤點(diǎn)一下「耗子尾汁」的三種用法↓↓↓鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴,、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的「耗子尾汁」,。它可以用于監(jiān)測(cè)小鼠血液成分的變化,,確認(rèn)小鼠是否患上了糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血,,實(shí)驗(yàn)用鼠尾尖取血的取血量較小,,但取血之后,小鼠還能繼續(xù)下一步建?;蛘邔?shí)驗(yàn),,完全沒有性命之憂。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備,,純度達(dá)到95%以上,。蕪湖鼠尾膠原報(bào)價(jià)
鼠尾膠原:含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值),。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,,在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,,切勿凍存,,有效期一年。廈門鼠尾膠原銷售廠家使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對(duì)初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明:不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。
鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟,,才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白,。這種膠原蛋白在37℃的條件下會(huì)形成3股螺旋結(jié)構(gòu),可以用來當(dāng)作細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì),。細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外)才能完成生長(zhǎng)過程,而有一些細(xì)胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,,這個(gè)時(shí)候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,,細(xì)胞就能更好地貼附上去,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞,,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。鼠尾膠原醋酸溶解:按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。
鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究,。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo),。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,Western-Blot檢測(cè)凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá)。在操作過程中要盡量保持低溫,。保存條件4℃保存,,切勿凍存,有效期一年,。武漢鼠尾膠原哪家便宜
結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,。蕪湖鼠尾膠原報(bào)價(jià)
I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,,經(jīng)過乙酸抽提、離心,、滅菌,、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,,屬于醫(yī)藥級(jí)別產(chǎn)品,,可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被),適合多種類型細(xì)胞的貼壁如肝臟細(xì)胞,、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,、胚胎細(xì)胞、肌細(xì)胞,、肺細(xì)胞,、神經(jīng)鞘細(xì)胞等。I型膠原蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板,,規(guī)格為6/24孔板,,表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附,。使用這種細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞,,可以獲得良好的細(xì)胞貼壁率,細(xì)胞增殖速度快,,形態(tài)均一,,細(xì)胞培養(yǎng)成功率高。蕪湖鼠尾膠原報(bào)價(jià)