鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導,。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達。鼠尾膠原,,是一種細胞支持物,,它是細胞外基質的主要成份。廈門鼠尾膠原銷售廠家
膠原蛋白的提取方法:酸法提取:酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,,從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,,而引起纖維膨脹、溶解,。作為溶劑使用的酸,,主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸,、硫酸,、醋酸、檸檬酸和甲酸等,。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,,用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結構。此法處理快速,,所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的,,適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備,但產(chǎn)品得率低,,設備腐蝕嚴重,,污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白,,得到高純度的膠原蛋白溶液,。合肥唐山鼠尾膠原這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結構,可以用來當作細胞培養(yǎng)的基質,。
細胞培養(yǎng)過程中,,細胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細胞除外)才能完成生長過程,而有一些細胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,,細胞就能更好地貼附上去,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細胞,,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細胞貼壁生長。耗子尾汁還能變得更加,,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提
鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提,、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟,,才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白。這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結構,,可以用來當作細胞培養(yǎng)的基質,。細胞培養(yǎng)過程中,細胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細胞除外)才能完成生長過程,,而有一些細胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用,。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,細胞就能更好地貼附上去,,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細胞,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細胞貼壁生長,。使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構,。
一種基于鼠尾膠原蛋白:1.一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,為鼠尾膠原蛋白,、聚乙烯醇,、殼聚糖、水制成的凍干止血材料,,各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為1-10%0.2-5%0.2-2%,,余量為水。2.根據(jù)權利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,,其特征在于凍干止血材料中,,各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5%2%1%,余量的水,。3.根據(jù)權利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,,其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾。剪下幾毫米小鼠尾巴,、在小鼠尾靜脈上劃一道小口,、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的「耗子尾汁」。北京鼠尾膠原價格
將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,,轉移到培養(yǎng)箱內,。廈門鼠尾膠原銷售廠家
鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察:果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色;礦化2d后,,膠體的顏色逐漸加深至乳白色;礦化6d后,,隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內部,,膠體顏色加深至純白色,,并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,予鑷子夾起,,其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落,。TEM表征顯示:礦化2d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結構逐漸模糊,,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內部,,膠原纖維部分礦化,沿著膠原纖維生長,,忖度變深,;礦化6d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結構完全消失,,膠原纖維內部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,,嵌入膠原纖維縱向生長。當鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時,,由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),,膠原纖維呈現(xiàn)黑色,選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征,。廈門鼠尾膠原銷售廠家