外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs）,，其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液,、唾液、尿液、乳汁等,，同時也存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化,，經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,，混勻，置于冰上,。再進行一系列的差速超速離心過程,，包括除雜、濾膜過濾,、超離等,。較后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）,、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中可將外泌體吸附并分離出來,。杭州正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標志物時發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn),，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,，其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調(diào)，進一步研究發(fā)現(xiàn),，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦用于外泌體提取的體液收集注意事項：操作要輕柔迅速,。

外泌體項目獲批學(xué)科方向：從統(tǒng)計來看,，與前年相似外泌體立項集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué),，近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成，耐藥性,，檢測等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer（IF=10.679）上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過TLR7/NFκB/c-My信號通路在女性食管ai中促進維持ai癥干細胞樣細胞的動態(tài)平衡,。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch（IF=5.646）上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運p-STAT3可促進結(jié)直腸ai細胞獲得性5-FU耐藥性,。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細胞外囊泡相關(guān)的miRNA作為子宮內(nèi)膜ai分子標志物的可能性。此外,，在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病,，中醫(yī)學(xué)及其他領(lǐng)域也有不少外泌體相關(guān)項目中標。

外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA,，能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達,，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中，參與一些病癥的形成和演化過程,。單個miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個mRNA結(jié)合,，從而阻滯整個生物通路。因此,，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優(yōu)勢,。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環(huán)游離miRNA的表達，與75例健康者相比,，發(fā)現(xiàn)了兩種高表達的miRNA（miR-25和miR-223）,。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估，結(jié)果顯示,，12個一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達,。Cazzoli等收集了30個血漿樣本，發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA（miR-378a,、-379a,、-139-5p、-200b-5p）在肺病患者血清中明顯升高,，用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積（AUC）為0.908,。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中,，包括血液,、唾液、尿液,、腦脊液和乳汁中,。

密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣，用的較少,。原理是：像所有的脂質(zhì)小囊泡一樣,，外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中,，其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml，將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質(zhì)上,，隨后通過離心將外泌體分離,。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時,，對離心時間極為敏感。具體步驟是：收集培養(yǎng)2d的上清液,。將培養(yǎng)上清液先以1500r/min離心5min除去細胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣，耗時,。長沙外泌體提取試劑廠家直銷

利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。杭州正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體的提取方法：1、色譜法,。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法,。樣品中大分子不能進入凝膠孔，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,，首先被流動相洗脫出來,；小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強地滯留,，更慢地被洗脫出,。分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍,。2、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細胞外泌體的一種新方法,。杭州正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家