外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心，這種操作簡單,、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性,，但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,，耗時(shí)，量少,。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。以提取尿液中的外泌體為例，每次至少需要200毫升的尿液量。北京外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,，還有研究表明,，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物,。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān),。開封正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家同時(shí)對超速離心機(jī)的設(shè)備要求以及操作程序的培訓(xùn)較大提高了提取成本。

研究表明被特定部位的細(xì)胞獲取的一些病癥外泌體可為一些病癥的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境,。用肺轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞重新定向,。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達(dá)譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),，而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān),。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取，進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移,。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后啟動(dòng)了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá),。較后通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測一些病癥轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。

外泌體提?。?,、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體,。根據(jù)外泌體的大小,，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm,、0.45μm或0.22μm的孔徑,，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體,，也有設(shè)計(jì)成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40-100nm外泌體：不過,，該方法由于過濾膜的粘附，可能會損失外泌體,，并且過濾時(shí)的壓力和剪切力,，可能會使外泌體變形受損,。2、基于聚合物的沉淀技術(shù),?；诰酆衔锏某恋砑夹g(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心,。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇（PEG）,。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn)，包括對分離的外泌體影響小,、pH中性等,。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會同時(shí)分離非囊泡污染物（包括脂蛋白）而且,，聚合物材料的混雜可能會影響下游分析,。外泌體提取：可分離到大小相近的囊泡顆粒,。

可以,。為了能夠高效提取細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體，磁珠可重復(fù)使用5次（同一樣品）,。試劑盒里的緩沖液含5次提取需要的量,。1mL體積以上細(xì)胞上清樣本建議進(jìn)行濃縮后再回收，提取時(shí)可進(jìn)行反復(fù)抽提,，提高提取效率,。用血液樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)磁珠狀況來判斷是否能重復(fù)利用,；若磁珠發(fā)生聚集,，利用渦旋儀也無法使磁珠分散，不建議繼續(xù)使用,。詳情參考操作說明書,。太好了，這樣實(shí)驗(yàn)成本瞬間就降下來了,，那樣品純化所需的比較低量是,？老師：使用旋轉(zhuǎn)器的需要500μL以上，使用離心管混合器的需要100μL,。樣品量更少的情況下加TBS到所需比較低量后再使用ExosomeCapture固定化磁珠,。同學(xué)：電鏡分析需要外泌體的量是多少？用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：抽血技巧,。合肥正規(guī)外泌體提取試劑廠家

利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。北京外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體的提取,、分離方法：梯度密度離心法,。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此,，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合，原理是先除去非囊泡物質(zhì),，再通過梯度密度濃縮提取外泌體,，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此,，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時(shí)間不充足，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,，特別是這個(gè)密度范圍又比較寬,。北京外泌體提取試劑直銷廠家