外泌體(exosome)是所有細(xì)胞釋放出的菌類大小的顆粒。它們天然地存在于血液中,。根據(jù)來自美國德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項新的研究,,對外泌體進(jìn)行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士,。在這項新的研究中,,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,,增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活,。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,,這是因為這些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞(包括病細(xì)胞)中。外泌體在免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),。成都外泌體提取試劑直銷廠家
外泌體:已經(jīng)有研究報道了各種Hh的胞外轉(zhuǎn)運機制,,但實際用于體內(nèi)Hh分泌和轉(zhuǎn)運的途徑尚不清楚。該研究顯示Hh在果蠅翅膀成蟲盤的分泌依賴于運輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合物(ESCRT)。在體內(nèi),,產(chǎn)生Hh的細(xì)胞中ESCRT活性的降低導(dǎo)致外部細(xì)胞表面保留Hh,。此外,產(chǎn)生Hh的細(xì)胞中的ESCRT活性對于長距離信號傳導(dǎo)是必需的,。證據(jù)表明Hh和ESCRT蛋白質(zhì)的庫在體內(nèi)一起分泌到細(xì)胞外空間中,,并且隨后可以在受體細(xì)胞的表面一起被檢測到。這些發(fā)現(xiàn)揭示了ESCRT蛋白質(zhì)在控制形態(tài)發(fā)生活性中的新功能,,揭示了一種新的機制,,通過細(xì)胞外囊泡在組織中轉(zhuǎn)運分泌的Hh,這是長距離靶向誘導(dǎo)所必需的,。成都外泌體提取試劑直銷廠家無法實現(xiàn)臨床的常規(guī)化應(yīng)用,。
目前的主流觀點認(rèn)為,外泌體的產(chǎn)生過程為:細(xì)胞膜內(nèi)陷,,形成內(nèi)體(endosome),,再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),,較后分泌到胞外成為外泌體,。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類,、DNA和RNA等重要信息,。外泌體較早見于1981年,EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,,并命名為exosome,。對于外泌體的作用,當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式,。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),,所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗一些病癥反應(yīng)。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì),。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多,,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應(yīng)答、抗原呈遞,、細(xì)胞分化,、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠,、超濾、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離,。
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細(xì)胞來源的外泌體,,包括免疫細(xì)胞(B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞),、病細(xì)胞、上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞,,釋放出帶有載體的外泌體,,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細(xì)胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細(xì)胞可直接或間接地受到外泌體的影響,,刺激或壓制其增殖和功能,。外泌體與代謝性和心血管疾病:外泌體可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用,。體外培養(yǎng)心血管疾病的細(xì)胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān),;體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的外泌體具有保護(hù)心血管的作用。這些發(fā)現(xiàn)表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA,,蛋白等物質(zhì)改變受體細(xì)胞的代謝狀態(tài),。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷外泌體提取:超濾膜也可用于分離外泌體,。
外泌體的提取方法:1,、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法,。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔,,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先被流動相洗脫出來,;小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞,,在柱中受到更強地滯留,更慢地被洗脫出,。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍,。2,、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質(zhì),利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,。金華外泌體提取試劑銷售廠家
專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來進(jìn)行體外培養(yǎng),。成都外泌體提取試劑直銷廠家
近年來,,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及一些病癥治病領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體來源及內(nèi)含物。幾乎所有類型的細(xì)胞都可以分泌外泌體,,同時外泌體也普遍存在于體液中,,包括血液、眼淚,、尿液,、唾液、乳汁,、腹水等,。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸(microRNA、lncRNA,、circRNA,、mRNA、tRNA等),、蛋白,、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81,、CD9、TSG101,、HSP27等,。外泌體鑒定。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM),、Nanosight,、WesternBlot、流式細(xì)胞術(shù),。成都外泌體提取試劑直銷廠家