鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用，同時(shí)它也是一種天然的黏附劑,，當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片，制備細(xì)胞爬 片時(shí),，可在瓶底涂一層膠原,，再放上小玻片,，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。通 過本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,，以及如何切割小玻片,，并利用鼠尾膠原將其固定于 培養(yǎng)瓶內(nèi)。 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料： 大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平,、生理 鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 1,、制備鼠尾膠原,。 2、切割小玻片,。 3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,。鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于,，包括以下步驟: (1)將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用,； (2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊，得到膠原溶脹液,； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1，在4°C,，48?74小時(shí)酶解,，期間間歇性攪拌。金華正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,，制備細(xì)胞爬片時(shí),，可在瓶底涂一層膠原。

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,，為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞，培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動(dòng)頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,，平均厚度約為1mm；HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開,；掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接；同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動(dòng)頻率是相同的,；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動(dòng)頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,，為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。

膠原蛋白分離提純實(shí)驗(yàn)方案：提取鼠尾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)步驟： 1,、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進(jìn)行 酶解， 持續(xù)一段時(shí)間待混合物變成無色,、 透明,、 粘稠液體后即可在 4℃， 5000g 的離心力下離心 20min,， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。 2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出,，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,，4℃，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀,。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解,。 3,、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理,，重復(fù)步驟 2 的過程 2~4 次,。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳,。膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料,。

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用：在國外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到 的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的 材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長因子(EGF Sigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰 蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞 懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下 皮膚后.以 消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液. 用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平 皿.(3)鼠尾膠原 凝膠體的制備:具體方法參見文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴 入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中 30rain,散盡剩余氨氣。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉,。鼠尾膠原醋酸溶解：將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,。長沙正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1. 主要材料、試劑和儀器鼠尾,、鹽酸、等滲氯化鈉溶液,、鈣液,、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEM HT770(日本日立公司),；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,，用75%的乙醇浸泡5 min,。將尾巴剪開，去掉皮毛,，并剪成小段，抽出銀色的肌腱,。將肌鍵剪斷置于平皿中,，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50 mL的比例加入0.1%的醋酸溶液,。搖晃,，將肌鍵分散于醋酸溶液中,，4 ℃放置一周,，然后以2186×g離心20 min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠,，置于冰箱4 ℃保存,。鼠尾膠原產(chǎn)品介紹