細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：細菌轉(zhuǎn)染：原理：對于用脂質(zhì)體不能實現(xiàn)轉(zhuǎn)染的細胞，可以采用細菌轉(zhuǎn)染,?？捎糜诘鞍踪|(zhì)過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法,。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中,，可用于難轉(zhuǎn)染細胞、原代細胞的穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染,。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌 → 采用非細菌法轉(zhuǎn)染包裝細胞系,，擴增并分離得到重組細菌顆粒→純化并滴定細菌液→轉(zhuǎn)導(dǎo)目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養(yǎng)物中的細菌,，并加入新鮮培養(yǎng)基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況,。在瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒中往往都含有一個報告基。武漢細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系的篩選：生長的細胞比不分裂的細胞更快的受到GENETICIN物品的影響,。轉(zhuǎn)染后,，在開始篩選前等待48-72小時，使細胞表達足夠量的抗性酶,，保證在開始篩選時可以自我保護,。轉(zhuǎn)染后48-72小時倒掉培養(yǎng)基，加入含有GENETICIN物品的培養(yǎng)基,，物品的濃度根據(jù)劑量反應(yīng)曲線確定,，足夠殺死未轉(zhuǎn)染細胞。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度,，包括細胞類型,，培養(yǎng)基和血清濃度等，所以有必要對每種細胞作一個劑量反應(yīng)曲線,，確定較佳濃度,。篩選較多可能需要一周時間，因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下,，細胞會分裂1-2次,。在次培養(yǎng)細胞時使用較低劑量的物品，一般是篩選劑量的一半,。篩選后的細胞一般是離散的克隆,，根據(jù)實驗?zāi)康牟煌梢苑謩e純化（克?。?，收集進行大量培養(yǎng)或染色并進行抗性克隆的計數(shù)。正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑價格較適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到對數(shù)生長期的細胞,。

如何高效率實現(xiàn)細胞轉(zhuǎn)染：轉(zhuǎn)化,、轉(zhuǎn)染,、轉(zhuǎn)導(dǎo)幾個名詞是從事生命科學(xué)研究的初學(xué)者經(jīng)常碰到的，也是讓人容易混淆的,。他們之間有什么區(qū)別和聯(lián)系呢：轉(zhuǎn)化(transformation)指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細胞（原核生物），并使宿主細胞獲得新的表型的過程,。轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)由噬菌體或細胞細菌介導(dǎo)的遺傳信息轉(zhuǎn)移過程稱轉(zhuǎn)導(dǎo)或傳染（Infection）,。轉(zhuǎn)染(transfection)是指真核細胞主動或者被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新表型的過程。對于真核生物,，轉(zhuǎn)染就是原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞,。轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染是將外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入真核細胞的過程,，是細胞和分子生物學(xué)研究的重要工具,。在現(xiàn)生命可續(xù)研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程,，如何將目的基因?qū)爰毎麅?nèi)是科學(xué)實驗過程中不可缺少的實驗技術(shù),，而細胞轉(zhuǎn)染是完成這一過程的必需步驟。

細胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩,。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘,。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。5.加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。6.到時后,，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時。瞬時轉(zhuǎn)染后,，可在48h-72h細胞長滿之后,，提取細胞蛋白或者RNA。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下,，還要考慮會不會存在試劑過期的情況,。毛博當年做轉(zhuǎn)染整整半年,，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine 2000過期了,。換了之后，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后,，就算沒有過失效期,，但是細胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢,，影響實驗進度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清,，會導(dǎo)致細胞大量死亡,。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清,。這個時候，較好不要換液,，不要打擾細胞,，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清,。過早的話,，會引起未轉(zhuǎn)染的細胞瘋狂生長。那么,，什么是較佳時機呢,？在20%的細胞變圓的時候，就是加血清的較佳時機,。細胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應(yīng)用而異,。石家莊正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家

轉(zhuǎn)染 ，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù),。武漢細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

細胞轉(zhuǎn)染之PEI 轉(zhuǎn)染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞,，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以 1×105 至 4×105細胞/cm2 的密度平鋪細胞于 35 mm 培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養(yǎng)皿總面積的 70－90％）,。將細胞置于含 5％CO2 的 37℃溫箱中孵育 8-24 h,，當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前 2 h 換液（用 1.5 ml 無血清培養(yǎng)基置換舊的培養(yǎng)基）,。注：PEI轉(zhuǎn)染法對細胞生長有克制作用,，在換液前細胞幾乎不生長,，所以需要密度比較大時做轉(zhuǎn)染。2.制備PEI-DNA 混合物以 35 mm 組織培養(yǎng)皿用 240 μl 反應(yīng)總體積為例,。先在無菌EP管中加入120 μl 1×HBS,再加入質(zhì)粒 DNA（總量 1-3 μg 為佳）,，混勻后加入等體積 PEI工作液，充分混勻后室溫靜置 20-30 min ,，較后將這 240 μl 的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,，輕輕搖動平皿混勻后置于含 5％ CO2的 37℃溫箱孵育。武漢細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好