外泌體的提取,、分離方法：聚合物沉淀法。聚合物沉淀法用于分離病毒和其他的生物大分子已有50多年歷史,，近幾年,，將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,，市場已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,，較常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits，該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,，但是價(jià)格昂貴,。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細(xì)胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜，之后再低速離心,。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢：無需沉淀試劑,，也無需過夜培養(yǎng),。濟(jì)南外泌體提取試劑廠家

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,，可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡,。外泌體的直徑在40-110nm之間,，其中包含RNA、蛋白質(zhì),、microRNA,、DN**段等多種物質(zhì)，存在于血液,、唾液,、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中,。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,，雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”,，所以才被排出來，但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞,。如今,，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來進(jìn)行體外培養(yǎng)。上海正規(guī)外泌體提取試劑外泌體的提取方法：密度梯度離心,。

用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：1,、抽血技巧。操作要輕柔迅速,。試管可翻轉(zhuǎn)8-10次使樣本與抗凝劑混勻,，避免劇烈搖晃?；靹蚝?，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準(zhǔn)確時(shí)間,，因?yàn)槌檠c離心之間的時(shí)間間隔可能是一個(gè)影響因素,。外泌體在抽血后30分鐘內(nèi)是比較穩(wěn)定的，若時(shí)間過長將導(dǎo)致外泌體數(shù)量增加,。血小板極易因抽血時(shí)的物理因素而并釋放出外泌體,，其中包括接觸、壓力,、切力,。2、抽血時(shí)間,。除了血液黏度,，體內(nèi)血液的各項(xiàng)指標(biāo)在1天中變化很大。生理節(jié)律會對血小板的產(chǎn)生很大的影響,。白細(xì)胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細(xì)胞和細(xì)胞會隨時(shí)間變化,。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會隨時(shí)間變化。目前尚無設(shè)計(jì)較好的實(shí)驗(yàn)對證實(shí)不同時(shí)間血液中外泌體的變化,，故應(yīng)在相同的時(shí)間采集樣本,。目前飲食是否會對EV產(chǎn)生影響尚未可知，但是由于脂蛋白可運(yùn)載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型,、數(shù)量和作用,，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時(shí)間進(jìn)行。

外泌體研究思路。外泌體研究通常與高通量測序的聯(lián)系緊密,，研究思路可以分為三大類：表達(dá)譜,、分子標(biāo)志物和分子機(jī)制方向，其中表達(dá)譜思路的特點(diǎn)就是短平快,、通常以測序數(shù)據(jù)為主要內(nèi)容,，短平快發(fā)表3-5分文章。而分子標(biāo)志物的特點(diǎn)是在表達(dá)譜基礎(chǔ)之上加入大量樣本驗(yàn)證,，建立ROC,、KM曲線，分析分子與臨床疾病的相關(guān)性為主,，通常文章影響因子在3-10分之間,。分子機(jī)制研究，顧名思義要做到細(xì)胞功能,、機(jī)制研究深度,，因此工作量通常較大，影響因子通常能夠上10+,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。多聚物沉淀法早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,。

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈,、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲,。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移,。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML）細(xì)胞的增殖、遷移和壓制細(xì)胞凋亡,。治病靶標(biāo),。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,，以明顯降低RAS活化,、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程,。免疫。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞,，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管,。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動脈硬化,。分子標(biāo)記。疾病診斷,。在酒精性肝病,、NASH、菌類性肝炎,、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預(yù)后標(biāo)志。外泌體的提取,、分離方法：超高速離心法,。南京外泌體提取試劑廠家直銷

外泌體提取：磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)。濟(jì)南外泌體提取試劑廠家

外泌體（Exosome）是細(xì)胞主動分泌的囊泡樣小體,，大小均一,，直徑30-200nm，密度1.10-1.18g/ml,，來源普遍,，幾乎所有細(xì)胞都可分泌，在血液,，尿液,，唾液，腦脊液,，腹水,，乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,。1996年,，研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng)，開啟了外泌體蛋白研究的新天地,。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎，但過程比較費(fèi)時(shí),，且回收率不穩(wěn)定,，純度也受到質(zhì)疑。濟(jì)南外泌體提取試劑廠家