無血清細(xì)胞凍存液的使用方法及注意事項：無血清細(xì)胞凍存液：含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時另一些保護劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶 液的電解質(zhì)濃度,減少陽離子進入細(xì)胞的數(shù)量,我公司無血清細(xì)胞凍存 液,為多種保護劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進行雙重保護,較大提高了細(xì)胞復(fù) 蘇存活率。 【產(chǎn)品用途】 1.用于免疫細(xì)胞及干細(xì)胞的存儲,。 2.細(xì)胞保藏中心,，用于細(xì)胞株的長期保存。 3.科研高校,，細(xì)胞株凍存,。 4.醫(yī)院樣本庫細(xì)胞樣本保存,。 【使用方法】 1,、細(xì)胞凍存前準(zhǔn)備 （1）要求凍存的細(xì)胞在對數(shù)生長期，且活率大于90%,。 （2）計算細(xì)胞密度,，一般要求密度在1-3x10 cells/mL，不同細(xì)胞系 請參照附表,。 2,、細(xì)胞凍存過程 （1）將要凍存的細(xì)胞懸液，進行細(xì)胞計數(shù),，計數(shù)后離心,，800 3min即可。 度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中,，根據(jù)密度調(diào)整細(xì)胞凍存 液用量,。 （3）反復(fù)吹吸混勻后，分裝于細(xì)胞凍存管中,，每管500ul-1000ul,， （建議500ul/管）?？焖賰龃婧喕藘龃娌襟E,，同時不需要使用梯度凍存盒。唐山正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液進貨價

細(xì)胞凍存液的作用是什么？滲透性冷凍保護劑：可以滲透到細(xì)胞內(nèi),，一般是一些小分子物質(zhì),，主要包括甘油、DMSO,、乙二醇,、丙二醇、乙酰胺,、甲醇等,。非滲透性冷凍保護劑：不能滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是些大分子物質(zhì),，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）,、蔗糖、聚乙二醇,、葡聚糖,、白蛋白以及Hetastarch等。冷凍保護劑同溶液中的水分子結(jié)合,，發(fā)生水合作用,，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成，同時冷凍保護劑可以通過在細(xì)胞內(nèi)外維持一定的摩爾濃度,，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，使細(xì)胞免受溶質(zhì)的損傷。滲透性冷凍保護劑的保護機制是在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前,，滲透到細(xì)胞內(nèi),，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，從而保護細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷同時,。細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細(xì)胞過分脫水皺縮,。金華正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)廠家待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后,，立即加入1 ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合。

細(xì)胞凍存秘籍：冷凍保護劑冷凍保護劑對于冷凍過程中細(xì)胞發(fā)生的損傷較小化是必要的,。較常見的冷凍保護劑是二甲基亞砜（DMSO）和甘油,。 DMSO（ATCC目錄號4-X，5×5mL）,，常用濃度為5至10％（v / v）;較適濃度因細(xì)胞系而異,。注意： DMSO是一種非常強大的溶劑，能夠迅速滲透完整的皮膚,。因此避免直接接觸DMSO,，并妥善處理含有DMSO的廢物,。另外，選擇DMSO時,，確保使用無毒的產(chǎn)品,。ATCC出售的DMSO，已經(jīng)經(jīng)過完全測試,，以確保其無毒（ATCC目錄號4-X,，5×5mL）。甘油常用終濃度為5％至15％,。較佳濃度取決于細(xì)胞系,。通常，增加凍存培養(yǎng)基中的血清濃度來增加難以保存細(xì)胞的存活率,。有時使用高達90％至95％的血清濃度（無培養(yǎng)基,，*血清加上低溫保護劑）。A. 用凍存培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，使較終細(xì)胞濃度達到每毫升2-5百萬個活細(xì)胞,。B. 在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞名稱，編號和凍存日期等信息,。然后將1.0到1.8毫升的細(xì)胞懸液加入到細(xì)胞凍存管中并密封,。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇操作步驟：細(xì)胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則，慢速冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水份滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)形成冰晶的機會,，快融以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細(xì)胞內(nèi),，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細(xì)胞的損傷,。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷,。無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢：通用型,，適用于凍存各種細(xì)胞系、原代細(xì)胞,。

細(xì)胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；2.取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來,；4.離心1000rpm,，5min；5.去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml,；6.將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml,；7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,，凍存時間及操作者；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min,；當(dāng)溫度達-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時,，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi)。無血清凍存液注意事項：凍存液中含DMSO成分,，為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套。成都無血清細(xì)胞凍存液哪里買

從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍,。唐山正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液進貨價

凍存方式：按照凍存保護液在凍結(jié)后是否形成冰晶來劃分，凍存方法可分為非玻璃化和玻璃化凍存兩種,。非玻璃化凍存是利用各種溫級的冰箱分階段降溫至-70℃～-80℃,，然后直接投入液氮進行保存；或者是利用電子計算機程控降溫儀以及利用液氮的氣,、液,，按一定的降溫速率從室溫降至-100℃以下，再直接投入液氮保存的方法,。以該種方法凍結(jié)的細(xì)胞懸液或多或少都有冰晶的形成,。玻璃化凍存則是指利用多種高濃度的冷凍保護劑聯(lián)合形成的玻璃化冷凍保護液保護懸浮細(xì)胞,，直接投入液氮進行凍存的方法。以該中方法凍結(jié)的細(xì)胞懸液沒有冰晶的形成,。但目前細(xì)胞凍存較常用的仍是前一種方法,。唐山正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液進貨價

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