無(wú)血清細(xì)胞凍存液：1. 逐滴加入5 - 7 mL的預(yù)熱的培養(yǎng)基到15 mL的離心管中，加入的同時(shí)輕輕混勻,。2. 室溫（15 - 25°C）以300 x g離心5分鐘,。3. 吸出培養(yǎng)基，使細(xì)胞沉淀完好無(wú)損,。使用2 mL血清移液管輕輕將細(xì)胞沉淀重懸于1 mL的培養(yǎng)基中,。小心保持細(xì)胞作為聚集體。4. 將0.5 mL的細(xì)胞混合物轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的預(yù)包被的6孔板的培養(yǎng)孔中（例如,，每個(gè)冷凍管可以鋪板兩個(gè)孔）,。注意：鋪板多少孔可能需要根據(jù)凍存的細(xì)胞聚集體數(shù)量進(jìn)行調(diào)整。通常在復(fù)蘇后,，要比在常規(guī)的傳代鋪板更多的細(xì)胞聚集體數(shù)量,。將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱?？焖偾昂笞笥业膿u晃培養(yǎng)板數(shù)次,，將細(xì)胞聚集體分布均勻。24小時(shí)內(nèi)不要移動(dòng)培養(yǎng)板,。1000 rmp離心5分鐘,，去除離心管中的上清液，收集細(xì)胞沉淀,。溫州無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家直銷

細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：1.取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套,，護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致炸列,。2.凍存液的問(wèn)題：凍存液的配置已是常識(shí),，在這里不作詳述，但二甲基亞砜（DMSO）對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用,，在常溫下,，二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大，因此,，必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化,。如果復(fù)蘇溫度太慢,，會(huì)造成細(xì)胞的損傷，二甲基亞砜（DMSO）選擇進(jìn)口產(chǎn)品,。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液,。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,，以減少對(duì)細(xì)胞的損傷,。青島無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品介紹可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液與含血清細(xì)胞凍存液對(duì)比：傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%,，血清的含量是10%,，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜）,，較后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存,。可見,，含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時(shí)遇到的問(wèn)題：1.凍存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購(gòu)買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液,，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮）,，步驟繁瑣,，耗時(shí)耗力。3.含血清,，細(xì)胞污染(病毒,、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高。4.血清批次,、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異,。5.需液氮凍存,，且不能原位（如孔板）凍存,。

細(xì)胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)：1,、液氮內(nèi)的細(xì)胞凍存較長(zhǎng)時(shí)間不要超過(guò)半年,，凍存在液氮中的細(xì)胞應(yīng)一段時(shí)間內(nèi)進(jìn)行更替。一個(gè)細(xì)胞系在培養(yǎng)一個(gè)月后,，可復(fù)蘇一管新的細(xì)胞確保其質(zhì)量沒有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后,，再凍存留種。2,、細(xì)胞復(fù)蘇時(shí),，為保證獲得較高的存活率和接種率，應(yīng)盡可能的快速完成復(fù)蘇,，以避免在升溫過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生,。書面介紹的復(fù)蘇溫度是37℃-42℃，但是本人在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)40℃環(huán)境下復(fù)蘇效果較好,。3.復(fù)蘇時(shí)使用的培養(yǎng)基和凍存時(shí)使用的培養(yǎng)基中的血清盡量保證同一批次,。可以防止或減少冷凍冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷作用,。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是：慢凍速融,，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑,，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,，PH,，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡,。在過(guò)去的幾十年中,，科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,，并配合手工使細(xì)胞從4℃,，-20℃，-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果,。但這種自制的凍存液儲(chǔ)存時(shí)間一般比較短,，不能滿足時(shí)間跨度大的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的需求。且這樣人力和時(shí)間成本大,，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)了不穩(wěn)定性,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ),。蕪湖南昌無(wú)血清細(xì)胞凍存液

無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色：可微量,，原位凍存，例如雜交瘤細(xì)胞的凍存,，省時(shí)高效,。溫州無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家直銷

無(wú)血清細(xì)胞凍存液的使用方法及注意事項(xiàng)：無(wú)血清細(xì)胞凍存液：含多種保護(hù)劑成分,一些保護(hù)劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶 液的電解質(zhì)濃度,減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,我公司無(wú)血清細(xì)胞凍存 液,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),較大提高了細(xì)胞復(fù) 蘇存活率。 【產(chǎn)品用途】 1.用于免疫細(xì)胞及干細(xì)胞的存儲(chǔ),。 2.細(xì)胞保藏中心,，用于細(xì)胞株的長(zhǎng)期保存,。 3.科研高校，細(xì)胞株凍存,。 4.醫(yī)院樣本庫(kù)細(xì)胞樣本保存,。 【使用方法】 1、細(xì)胞凍存前準(zhǔn)備 （1）要求凍存的細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,，且活率大于90%,。 （2）計(jì)算細(xì)胞密度，一般要求密度在1-3x10 cells/mL,，不同細(xì)胞系 請(qǐng)參照附表,。 2、細(xì)胞凍存過(guò)程 （1）將要凍存的細(xì)胞懸液,，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),，計(jì)數(shù)后離心，800 3min即可,。 度保存的無(wú)血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中,，根據(jù)密度調(diào)整細(xì)胞凍存 液用量。 （3）反復(fù)吹吸混勻后,，分裝于細(xì)胞凍存管中,，每管500ul-1000ul， （建議500ul/管）,。溫州無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家直銷