無血清細(xì)胞凍存液：解凍解凍后,，應(yīng)該立即鋪板在預(yù)先包被好的培養(yǎng)皿中,。上述凍存的一管細(xì)胞可以成功的鋪板到6孔板的 1 - 2孔,。1. 開始之前,，提前準(zhǔn)備好以下材料：試管,，恢復(fù)至室溫的培養(yǎng)基,，預(yù)先包被的培養(yǎng)板,，確保整個(gè)解凍復(fù)蘇程序可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成,。注意：不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基,。2. 在37°C水浴中快速解凍,，持續(xù)溫和的在水中晃動(dòng)凍存管，直到剩余少量細(xì)胞還處于凍存狀態(tài),。3. 水浴中取出凍存管,，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。4. 用2 mL的血清移液管把細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到一個(gè)15 mL的錐形試管。注意：用2 mL的血清移液管代替1 mL的頭可以減少細(xì)胞聚集體的分解,。降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,，減少陽離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量。武漢無血清細(xì)胞凍存液價(jià)格

細(xì)胞凍存秘籍：冷凍保護(hù)劑冷凍保護(hù)劑對(duì)于冷凍過程中細(xì)胞發(fā)生的損傷較小化是必要的,。較常見的冷凍保護(hù)劑是二甲基亞砜（DMSO）和甘油,。 DMSO（ATCC目錄號(hào)4-X，5×5mL）,，常用濃度為5至10％（v / v）;較適濃度因細(xì)胞系而異,。注意： DMSO是一種非常強(qiáng)大的溶劑，能夠迅速滲透完整的皮膚,。因此避免直接接觸DMSO,，并妥善處理含有DMSO的廢物。另外,，選擇DMSO時(shí),，確保使用無毒的產(chǎn)品。ATCC出售的DMSO,，已經(jīng)經(jīng)過完全測(cè)試,，以確保其無毒（ATCC目錄號(hào)4-X，5×5mL）,。甘油常用終濃度為5％至15％,。較佳濃度取決于細(xì)胞系。通常,，增加凍存培養(yǎng)基中的血清濃度來增加難以保存細(xì)胞的存活率,。有時(shí)使用高達(dá)90％至95％的血清濃度（無培養(yǎng)基，*血清加上低溫保護(hù)劑）,。A. 用凍存培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，使較終細(xì)胞濃度達(dá)到每毫升2-5百萬個(gè)活細(xì)胞。B. 在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞名稱,，編號(hào)和凍存日期等信息,。然后將1.0到1.8毫升的細(xì)胞懸液加入到細(xì)胞凍存管中并密封。武漢無血清細(xì)胞凍存液價(jià)格在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),，較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率,。

以前在另一家實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，凍存細(xì)胞根本就沒有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作,。凍存的細(xì)胞有293T,、PT67、C2C12,、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞）,、HelaS3、HelaD,、U2OS,、HKC、RK3E,、ECO,、H292、HSY,、COS7,、SupT1等。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心,，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0),，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中,，較久保存,，幾年后細(xì)胞的活力仍沒有什么受損，照常能復(fù)蘇,，成活率高,。但有三點(diǎn)須注意：（1）一是細(xì)胞的生長狀態(tài)要好，不能長得過稀,，同樣也不能過密,，細(xì)胞的狀態(tài)看起來相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長24h才能全滿,，萬一細(xì)胞狀態(tài)不好,，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細(xì)胞的量要留心,，不能太密也不能太稀,，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時(shí)間不能過長,，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里,。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞，半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性,，但一年的細(xì)胞就沒有活的,。

無血清細(xì)胞凍存液與傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液比較及優(yōu)勢(shì)：1.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液只適用于含血清細(xì)胞的凍存，但并不適用于無血清培養(yǎng)的細(xì)胞,，例如一些CIK細(xì)胞等,，而無血清細(xì)胞凍存液即適用于含血清細(xì)胞的凍存，又適用于無血清細(xì)胞的凍存,，是一種通用型細(xì)胞凍存液,，通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株,；2.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含10%胎牛血清，因血清是動(dòng)物源性成份,，因此病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)很高，而無血清細(xì)胞凍存液因不含血清,，只含DMSO,、葡萄糖等營養(yǎng)成份，較大降低了動(dòng)物血清來源病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn),，確保凍存細(xì)胞的安全；3.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含血清,，但動(dòng)物血清成分復(fù)雜,，個(gè)體差異大，且生產(chǎn)來源不穩(wěn)定,，因此批次間質(zhì)量常常不穩(wěn)定,，這導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)也會(huì)受到影響，而無血清細(xì)胞凍存液成分和配比明確,，批次間差異很小,，能夠保證生長細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性，細(xì)胞存活率高,。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,。

細(xì)胞凍存秘籍：1.在倒置相差顯微鏡上每隔幾分鐘檢查酶處理的進(jìn)展情況。一旦細(xì)胞變圓,，輕輕敲擊細(xì)胞瓶使其脫離塑料表面,。加入5 mL含血清的生長培養(yǎng)基滅活胰酶?？赡苄枰?jiǎng)×业囊埔翰僮鱽硎古囵B(yǎng)容器底部的剩余細(xì)胞脫落,，或?qū)⒓?xì)胞團(tuán)塊分解成單細(xì)胞懸浮液。胰酶的去除或失活對(duì)于冷凍細(xì)胞至關(guān)重要,。如果游離試劑不能直接滅活,，可以通過下一步的離心去除。2.用15ml離心管收集細(xì)胞,。取出樣本進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),，剩余的細(xì)胞懸液以約100×g離心5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀。離心時(shí),，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),。使用臺(tái)盼藍(lán)染液檢查細(xì)胞的活性。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色：成分明確,，無批次差異,。武漢無血清細(xì)胞凍存液價(jià)格

無血清細(xì)胞凍存液可用于T淋巴細(xì)胞,、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ)。武漢無血清細(xì)胞凍存液價(jià)格

新常態(tài)下細(xì)胞凍存指南：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍速融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。典型的細(xì)胞凍存液是在生長培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO,。目前在有些實(shí)驗(yàn)室中仍然采用這種自制自配的凍存液,，優(yōu)點(diǎn)是成本低，適合自己的細(xì)胞,。武漢無血清細(xì)胞凍存液價(jià)格