鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，其特征在于，包括以下步驟: (1)將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用； (2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊，得到膠原溶脹液,； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1，在4°C,，48?74小時(shí)酶解,，期間間歇性攪拌。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用,。溫州正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料。杭州北京鼠尾膠原細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例,。

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果,。方法制作鼠尾膠原，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用,。結(jié)果無鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液,，不宜封接,；有鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,，易于封接和長時(shí)間(約8h)的觀察和記錄,。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌,。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,，這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。 在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I,、無菌10×PBS、無菌蒸餾水,、無菌1M NaOH,。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1M NaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積，混勻,，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí)。6）使用時(shí),，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。制備鼠尾膠原（兩個(gè)同學(xué)一組操作）,。昆明正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。溫州正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，其特征在于,，包括以下步驟: (1)將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用,；(2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊，得到膠原溶脹液,； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1，在4°C,，48?74小時(shí)酶解,，期間間歇性攪拌； (5)將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,，收集上清液,；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時(shí)，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀。溫州正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

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