鼠尾膠原蛋白：膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,，但在皮膚、肌腱,、骨骼中分布較為普遍,。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),，如肝細(xì)胞、纖維細(xì)胞,、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細(xì)胞等。另外,，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長,、分化、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用,。膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,，可用于制備三維膠,，模擬細(xì)胞真實(shí)的生長環(huán)境；也可以用于包被組織培養(yǎng)皿表面,，提高細(xì)胞表面粘附性,，比如培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞、肝細(xì)胞等原代細(xì)胞,。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時(shí)后。蕪湖鄭州鼠尾膠原

膠原蛋白分離提純實(shí)驗(yàn)方案：提取鼠尾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)步驟： 1,、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進(jìn)行 酶解,， 持續(xù)一段時(shí)間待混合物變成無色、 透明,、 粘稠液體后即可在 4℃,， 5000g 的離心力下離心 20min， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。 2,、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出,，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,，4℃，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀,。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解,。 3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理,，重復(fù)步驟 2 的過程 2~4 次,。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳。北京鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉。

具體實(shí)施方式實(shí)施例1 止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇,、殼聚糖作為輔料,。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?0.2% 0.2%。余量為水,。2,、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板，-40°C預(yù)凍池,，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h,，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料,。Co60輻射滅菌,，干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血,。實(shí)施例2 止血材料的制備1,、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料,。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%,，余量為水,。2,、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)板，-20°C預(yù)凍,，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h,，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料,。Co60輻射滅菌,，干燥保存。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用,。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1M NaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1M NaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積,，混勻,，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí)。6）使用時(shí),，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）,。貴陽正規(guī)鼠尾膠原哪家好

鼠尾膠原，是一種細(xì)胞支持物,，它是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成份,。蕪湖鄭州鼠尾膠原

膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚,、肌腱,、骨骼中分布*為普遍。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體,，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu)，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),，如肝細(xì)胞,、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細(xì)胞等,。另外，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長,、分化,、遷移和組織態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。注意事項(xiàng)：1） 為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。2） 整個(gè)操作請于冰上進(jìn)行，因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠,。3） 整個(gè)操作請?jiān)跓o菌環(huán)境下無菌操作,，避免污染以影響細(xì)胞生長。蕪湖鄭州鼠尾膠原

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