提取鼠尾腱膠原工藝的優(yōu)化：單因素分析,膠原提取率在一定參數(shù)范圍內(nèi)隨浸提時間、乙酸濃度及料液比的增加而增加,。正交試驗,鼠尾腱膠原提取的較佳工藝參數(shù)為浸提時間72h,、乙酸濃度0.5mol·L-1、料液比為1∶40,。SDS-PAGE電泳顯示,樣品為Ⅰ型膠原,單寧酸沉淀實驗顯示膠原降解程度低,傅里葉紅外光譜顯示膠原結(jié)構完整,。樣品氨基酸含量測定符合膠原蛋白的成分特征。中性膠原溶液在37℃時能夠形成固態(tài)膠原凝膠,膠原凝膠經(jīng)過碳化二亞胺(EDC)交聯(lián)后,掃描電鏡下顯示內(nèi)部相互連接,構成孔徑適中的蜂窩狀多孔結(jié)構,。結(jié)論:成功建立并優(yōu)化鼠尾腱膠原蛋白的提取工藝,得出浸提時間,、乙酸濃度及料液比等因素的較佳工藝參數(shù),有效提高了鼠尾腱膠原的提取效率。鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,，可用于化妝品，工業(yè)和食品生產(chǎn)等領域,。深圳鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質(zhì)量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子,。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150 μL滴在薄膜上,，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠( ，其生物力學強度極差,，一碰即散,。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質(zhì)量130 000附近有明顯條帶,，另一條帶的相對分子質(zhì)量大于170 000(圖 2) ,。膠原蛋白濃度為1.8 mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中,，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中,。礦化2、6 d后,，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察,。貴陽鼠尾膠原哪里買通常情況下骨質(zhì)總量中的鈣、鎂,、磷等無機物質(zhì)光占總量的百分之幾而膠原蛋白等有機物質(zhì)卻要占超過80%,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下 放置 20 分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是 10PBS,， 使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡,。 B．含細胞的三維膠原的制備（以配制 200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH 加到膠原溶液中，會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即 混勻,。再加入 23ul 10PBS 10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH 左右,，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用 pH 試紙測試)。加入 760ul 的細胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放 20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 注意事項：在室溫下pH 中性時可迅速成膠，在操作過程中要 盡量保持低溫,。

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化鉀 100 mL,，用1 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,，倒入0.5 mL自組裝液,，室溫放置20 min。予自組裝液自組裝24 h,。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培養(yǎng)皿中,，將自組裝24 h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水,、50%乙醇,、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10 mmol/L 二水氯化鈣+150 mmol/L氯化鈉+50 mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350 μg/mL,；滴加1 mol/L的氯化氫，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,，然后緩慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氫二鈉),，約16滴/min。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時后,。

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用,。深圳鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理,。深圳鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

膠原蛋白分離提純實驗方案：提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟： 1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行 酶解,， 持續(xù)一段時間待混合物變成無色,、 透明、 粘稠液體后即可在 4℃,， 5000g 的離心力下離心 20min， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。 2,、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出,，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,，4℃，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀,。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解,。 3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復進行鹽析處理,，重復步驟 2 的過程 2~4 次,。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。深圳鼠尾膠原生產(chǎn)廠家