鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1. 主要材料,、試劑和儀器鼠尾、鹽酸,、等滲氯化鈉溶液、鈣液,、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEM HT770(日本日立公司),；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,，用75%的乙醇浸泡5 min,。將尾巴剪開，去掉皮毛,，并剪成小段，抽出銀色的肌腱,。將肌鍵剪斷置于平皿中,，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡,。吸去等滲氯化鈉溶液,，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50 mL的比例加入0.1%的醋酸溶液,。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中,，4 ℃放置一周，然后以2186×g離心20 min,。在醋酸溶液的酸解下,，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4 ℃保存,。膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料,。南京濟南鼠尾膠原

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑，可用于細胞培養(yǎng)皿的包被,，特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng),；也可用于制備三維膠原凝膠，使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長,。制備鼠尾膠原方法：1,、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘,；2,、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高,，折斷尾骨后拉出尾腱,；3、將尾腱剪斷置于平皿中,，生理鹽水浸泡；4,、重復(fù)步驟2,、3，直至尾腱量夠用,；5,、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）,；6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中；7,、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液,；8,、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期,；9,、離心,，4000轉(zhuǎn)/分，10-15分鐘,；10,、吸取上清，分裝成小瓶,，4℃保存,。合肥正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗長時程的記錄,。

詳細步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開,、去掉皮毛,，并剪成小段（3cm左右），抽出銀色的尾鍵,；3.把剪碎的尾鍵置于150ml,，0.1％消過毒的醋酸中，4℃放置,，并不時振蕩；4.48h后取上清,，4000轉(zhuǎn)離心30min后,，取上清,；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存,。有時可繼續(xù)向4,。中沉淀中加入10－20ml醋酸,，重復(fù)以上步驟,，以制備更多的鼠尾膠,。在使用時，先將冰存的膠原液在室溫下解凍,，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液,，在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液,。2）若包被的是培養(yǎng)瓶，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻,。讓氨氣充入瓶內(nèi)后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞,。若為培養(yǎng)皿或板的話,，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi),，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),，蓋緊飯盒蓋,，四周用封口膠封死,。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，其特征在于,，包括以下步驟: (1)將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,，真空冷凍干燥備用； (2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊,，得到膠原溶脹液； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1,，在4°C,，48?74小時酶解，期間間歇性攪拌,。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,。

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,，在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和,。需要的溶液 ( 均需要 無菌 ,、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O,。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試),。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。南京濟南鼠尾膠原

它是研究成纖維細胞與細胞外基質(zhì)之間以及細胞之間相互作用的良好模型,。南京濟南鼠尾膠原

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進體外培養(yǎng)細胞（特別是上皮細胞）貼壁的作用,，同時它也是一種天然的黏附劑,，當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,，制備細胞爬 片時，可在瓶底涂一層膠原,，再放上小玻片,，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中,。通 過本實驗可掌握鼠尾膠原的制備方法,，以及如何切割小玻片,，并利用鼠尾膠原將其固定于 培養(yǎng)瓶內(nèi),。 實驗設(shè)備及材料： 大鼠尾巴、剪刀,、鑷子,、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿,、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平,、生理 鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原,。 實驗內(nèi)容： 1、制備鼠尾膠原,。 2,、切割小玻片,。 3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。南京濟南鼠尾膠原