鼠尾膠原，10mg包裝,，配制方法如下：1.配0.1M的乙酸溶液100ml,。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,，容量瓶配制比較準(zhǔn)確,。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液（不要用*加,，吸十次不如加一次z準(zhǔn)確）,，加入盛膠原的瓶中，輕輕顛倒,，不要震蕩，蛋白 容易起泡,。幾分鐘即可,，蛋白質(zhì)非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,，比青霉素瓶大點的就行,。用*在瓶底加1ml氯仿，打到一檔就行,，避免加入氣泡,。然后4度過夜除菌,。4.第二天將上層膠原溶液分裝進EP管中,。用封口膜封口,，4度保存,，勿冷凍。膠原蛋白是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。成都正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原：1實驗制備：實驗設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀、鑷子,、止血鉗,、彎頭吸管、平皿,、三角燒瓶、燒杯,、量筒,、天平、生理鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原,。 實驗內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原（兩個同學(xué)一組操作）,。2,、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。實驗步驟：制備鼠尾膠原：1、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘,；2,、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的較高,，折斷尾骨后拉出尾腱,；3、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡,；4、重復(fù)步驟2,、3，直至尾腱量夠用,；5,、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）,。鄭州正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2誘導(dǎo)。24 h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá),。結(jié)果與結(jié)論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，其特征在于,，包括以下步驟: (1)將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,，真空冷凍干燥備用,；(2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,，期間不斷攪拌，防止凍結(jié)成塊,，得到膠原溶脹液,； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1,，在4°C,，48?74小時酶解，期間間歇性攪拌,； (5)將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理,，收集上清液；在冰水浴中,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時,，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀,。制備鼠尾膠原：按每克尾腱50ml的比例,，加入0.1%醋酸溶液。

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化鉀 100 mL,，用1 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2,。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中，倒入0.5 mL自組裝液,，室溫放置20 min,。予自組裝液自組裝24 h。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培養(yǎng)皿中,，將自組裝24 h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水,、50%乙醇,、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10 mmol/L 二水氯化鈣+150 mmol/L氯化鈉+50 mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350 μg/mL,；滴加1 mol/L的氯化氫，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,，然后緩慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氫二鈉),，約16滴/min。論鼠尾膠原能促進毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年。鄭州正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷

將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。成都正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,，進行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料,，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu),。成都正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹