鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的,，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。溫州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1M NaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1M NaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻,，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6）使用時,，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。武漢正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦4°C沉淀10小時,，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀,。

利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。 方法 通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白，并重構(gòu)成膠原纖維,。然后,，將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2～6 d，通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化,。 結(jié)果 酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維,，并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示：礦化2 d后,，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維,，膠原纖維部分礦化；礦化6 d后，膠原纖維內(nèi)部完全礦化,，形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料,。 結(jié)論 利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維，經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等 步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,，培養(yǎng)一些在普通細胞 培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,，模擬真實的生長環(huán)境,， 使細胞在三維環(huán)境中生長。 1,，在使用鼠膠原蛋白 型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12 細胞的 貼壁和生長,。 1mg/ml濃度以上，pH 左右時可形成具有一定強度的三維膠,，檢查到 NIH-3T3 細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12 細胞在三維膠表面 正常生長,。 使用方法： 1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度： 1-5ug/cm 0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理,，收集上清液,；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中,，調(diào)節(jié)pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時,，去除上清液，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀。將尾腱剪斷置于平皿中,，生理鹽水浸泡,。石家莊鼠尾膠原報價

鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠作為基質(zhì)包被培養(yǎng)器皿,。溫州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾膠原使用方法：1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時后,，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。三維膠原凝膠的制備：A,、無細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水,，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要測定pH值）,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。溫州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家