鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下 放置 20 分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是 10PBS， 使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。 B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制 200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH 加到膠原溶液中，會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即 混勻,。再加入 23ul 10PBS 10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH 左右,，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用 pH 試紙測試)。加入 760ul 的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放 20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 注意事項(xiàng) 型在室溫下pH 中性時(shí)可迅速成膠,，在操作過程中要 盡量保持低溫。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。制備鼠尾膠原（兩個(gè)同學(xué)一組操作）,。武漢正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：兩組培養(yǎng)皿中，隨著過氧化氫濃度的增高,，均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,，細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降，細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,，Bcl-2/Bax比值明顯降低,，呈劑量依賴性。而在相同濃度過氧化氫誘導(dǎo)下,，與對照組相比,，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯減弱，細(xì)胞存活率,、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,，細(xì)胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低。表明鼠尾膠原對過氧化氫所致的心肌細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用,，其機(jī)制可能與提高超氧化物歧化酶活力,，減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。昆明鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每 3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋,。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為 3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）,。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū),，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。

鼠尾膠原蛋白：膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,，但在皮膚、肌腱,、骨骼中分布較為普遍,。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體,，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì)，如肝細(xì)胞,、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細(xì)胞等,。另外，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長,、分化,、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,，可用于制備三維膠,，模擬細(xì)胞真實(shí)的生長環(huán)境；也可以用于包被組織培養(yǎng)皿表面,，提高細(xì)胞表面粘附性,，比如培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞、肝細(xì)胞等原代細(xì)胞,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

鼠尾膠原制備詳細(xì)步驟： 1,、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡 5 分鐘,； 2.將尾巴剪開,、去掉皮毛，并剪成小段,，抽出銀色的尾鍵 3,、將尾腱剪斷置于平皿中,，PBS 浸泡； 4,、將所有的尾鍵放于 Tris-HCl 中,，4 度過夜。 0.05mol/L Tris-bas 的 Tris-HCl 的配制方法,。 稱量 6gTris 置于 1L 燒杯中,，加入約 800ml 去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?，濃鹽酸調(diào)節(jié) PH,，高壓滅菌。 5,、吸去 Tris-HCl,，將尾腱稱重（0.5-1 克）； 6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中； 7,、按每克尾腱 50ml 的比例,，加入 0.1%醋酸溶液； 8,、搖晃,，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期,； 9,、離心，4 度 4000 轉(zhuǎn)/分,，30 分鐘,； 10、吸取上清,，過 300 目濾器,。 11、每 600ml 上述粗提液中加入 100ml 0.14 mol/LNaOH,，8000 轉(zhuǎn) 5min 離心,，棄上清，留絮狀沉淀,。 12,、將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用 0.1mol/L（1000:6）醋酸溶解沉淀物,。制備鼠尾膠原：手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的,，折斷尾骨后拉出尾腱。唐山正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話

結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,。武漢正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：三維膠原的制備 鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上,， pH 左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度 1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中,，在成膠過程中需要加入 0.06體積的 0.1mol/L NaOH 來中和,。 需要的溶液 （均需要無菌、 預(yù)冷） 10mg/L 酚紅用于pH 指示） 0.1mol/LNaOH,，0.1mol/L乙酸(一 般不用),，雙蒸水 200ul鼠尾膠原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到膠原溶液中,， 會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的 膠原凝結(jié)） 立即混勻,。再加入 100ul 10PBS 10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后 pH 左右,，如果PBS 或培養(yǎng)液中沒有加 酚紅,，初次使用時(shí)需要用 pH 試紙測試)。武漢正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家