選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),,標(biāo)本接種于此類培養(yǎng)基后,,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,,更有利于目的菌的增殖或分離,。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過一定時(shí)間的增菌培養(yǎng),再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基,,可以提高目的菌的陽性檢出率,。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠,、燦爛綠,、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉,、膽鹽,、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜,、準(zhǔn)確,,有的劇毒,有的不耐高熱,,配制時(shí)須特別注意,。細(xì)菌L型分離瓊脂 L型細(xì)菌高滲鹽增菌培養(yǎng)基 幽門螺桿菌液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) ATYP培養(yǎng)基 ATYP瓊脂。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液
營養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media) 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加一些特殊的營養(yǎng)物質(zhì),,如葡萄糖,、血液、血清,、酵母浸膏,、生長(zhǎng)因子等,可供營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌在其中生長(zhǎng),。例如鏈球菌,、肺炎鏈球菌等需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng);結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)基中須添加雞蛋,、馬鈴薯,、甘油等。比較常用的營養(yǎng)培養(yǎng)基是血瓊脂平板,。增菌培養(yǎng)基(enrichment media) 一般為液體培養(yǎng)基,,用于細(xì)菌的增菌培養(yǎng),可泛用,,也可專門用的,,在專門用的增菌培養(yǎng)基中常含有目的菌生長(zhǎng)所需要的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或生長(zhǎng)因子。肉湯培養(yǎng)基(測(cè)磷細(xì)菌菌數(shù))乳酸菌氯霉素肉湯1 乳酸菌氯霉素瓊脂2 Raka-Ray瓊脂 改良M17培養(yǎng)基AAM培養(yǎng)基 LC瓊脂。
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高,。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,,溶液會(huì)變堿,,Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,,需要用Eagle′s液,,如果只是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織,用Hanks′液就可以了,。由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4,,偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同,,原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差,,無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說,,細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,。在配制培養(yǎng)用液時(shí),需要注意一點(diǎn):新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時(shí),,溶液的pH 還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右,。
不同類型微生物生長(zhǎng)對(duì)氧化還原電位(F)的要求不一樣,一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時(shí)可正常生長(zhǎng),,一般以+0.3—+0.4V為宜,,厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長(zhǎng),兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時(shí)進(jìn)行好氧呼吸,,在+0.1V以下時(shí)進(jìn)行發(fā)酵,。F值與氧分壓和pH有關(guān),,也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響,。在pH相對(duì)穩(wěn)定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng),、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,,或加入氧化劑,從而增加F值,;在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸,、硫化氫、半胱氨酸,、谷胱甘肽,、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。有機(jī)磷細(xì)菌培養(yǎng)基不含瓊脂 細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌培養(yǎng)基YPG培養(yǎng)基有機(jī)磷細(xì)菌培養(yǎng)基肉湯培養(yǎng)基(測(cè)磷細(xì)菌菌數(shù))。
什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,?酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色,。酚紅本身對(duì)生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生影響,,可以通過純化技術(shù)去除,但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,,影響細(xì)胞生長(zhǎng),,當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分,,很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基,。研究表明,酚紅可以模擬固醇類的作用,。為避免固醇類反應(yīng),,培養(yǎng)細(xì)胞,尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),,用不加酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測(cè),一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。KF鏈球菌瓊脂 Slantez and Bartley培養(yǎng)基 TYC瓊脂培養(yǎng)基 腸球菌推定肉湯(EP肉湯)。三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基
脫硫弧菌培養(yǎng)基基礎(chǔ) Waksman液體培養(yǎng)基 Starky液體培養(yǎng)基 Starky硫代硫酸鈉液體培養(yǎng)基,。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,細(xì)胞培養(yǎng)基是不可或缺的,細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),,也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境,。通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)需要加入血清,以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活,。而除了血清之外,,部分細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分來維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素,,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇,,不同細(xì)胞加入量會(huì)有差異,需根據(jù)細(xì)胞類型判斷,。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液
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