培養(yǎng)基的種類有哪些,？鑒別培養(yǎng)基：利用細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同,，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑,，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)過程中分解底物所釋放的不同產(chǎn)物,，通過指示劑的反應(yīng)不同來鑒別細(xì)菌,。例如糖發(fā)酵管,、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）,、伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂和動(dòng)力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基等,。選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入抑制劑，去抑制標(biāo)本中的雜菌生長(zhǎng),，有助于所選擇的細(xì)菌種類的生長(zhǎng),。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌,，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌,，因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到,。液體培養(yǎng)基,、固體培養(yǎng)基和半固態(tài)培養(yǎng)基是常用的培養(yǎng)基種類。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎(chǔ)

在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽,，它可提供營(yíng)養(yǎng),，但卻在生理 pH 條件下會(huì)降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強(qiáng)的緩沖劑,，能使細(xì)胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強(qiáng),。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸,，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動(dòng),。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境,，CO2 氣體迅速逸出,，pH迅速升高，若加了HEPES,，此時(shí)可以維持 pH7.0 左右,。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加HEPES。神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)的過程中能用到,。TGY瓊脂培養(yǎng)基在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)通常還需要添加藥物,，以防止細(xì)菌污染,。

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎,？L-谷氨酰胺（L-Glutamine）是細(xì)胞生長(zhǎng)的必須氨基酸,，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源，參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L-谷氨酰胺在溶液中狀態(tài)不穩(wěn)定,，它的降解速率隨保存時(shí)間，保存溫度及保存環(huán)境pH值等變化而變化,。L-丙胺酰-谷氨酰胺（L-alanyl-L-glutamine）是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品,，其在水溶液中穩(wěn)定性高，即可保持長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的營(yíng)養(yǎng)供給,，也降低了分解產(chǎn)物造成的細(xì)胞毒性,。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液（L-alanyl-L-glutamineslution）可作為哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。與谷氨酰胺相比,，L-丙胺酰-谷氨酰胺不會(huì)自行降解成氨而導(dǎo)致細(xì)胞毒性,，作為添加物培養(yǎng)條件更加可控，可有效提高細(xì)胞活力,。

胰島素（Insulin）作用普遍,，包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對(duì)細(xì)胞的作用,，進(jìn)而引起組織乃至機(jī)體的整體反應(yīng),。一般可將胰島素在細(xì)胞水平的作用分為三大類：代謝作用、促生長(zhǎng)作用,、以及代謝和促生長(zhǎng)混合作用,。胰島素對(duì)細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過其與細(xì)胞膜上的胰島素受體（Insulin receptor, IR）相互作用而介導(dǎo)，而胰島素對(duì)細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用則是通過其與細(xì)胞膜上胰島素的樣生長(zhǎng)的因子受體（IGF Receptor, IG）相互作用而介導(dǎo)的,。在無血清細(xì)胞培養(yǎng)液中,，常添加胰島素來維持細(xì)胞生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)葡萄糖,、氨基酸和脂肪酸的攝取,、利用和貯存，同時(shí)抑制糖原,、蛋白質(zhì)和脂肪的分解,。生長(zhǎng)細(xì)胞需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源,、微量元素和維生素等,。

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響,？一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為pH的緩沖系統(tǒng),，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2,；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5g時(shí),，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。NaHCO3的作用：培養(yǎng)基中使用了 NaHCO3-CO2 緩沖系統(tǒng),，并采用開放培養(yǎng),，使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時(shí)溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度（5%） ,，與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值,。NEAA：非必須氨基酸,，NEAA（非必需氨基酸） 是含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到的原培養(yǎng)基不同,，NEAA 也有不同的種類,，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine,、L-Asparagine,、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid,、L-Glycine,、L-Proline、L-Serine,。半固態(tài)培養(yǎng)基是一種介于液態(tài)培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基之間的混合形式,，常用于篩選微生物菌株。假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基P基礎(chǔ)

好氧菌需要富含氧氣和富含葡萄糖的培養(yǎng)基,，而厭氧菌則需要采用無氧培養(yǎng)技術(shù),。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎(chǔ)

以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ)，向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,，微量元素100×母液20mL,，鐵鹽100×母液20mL，維生素100×母液20mL,，肌醇200×母液10mL,，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培養(yǎng)基后,，再加入0.5mg·L-1的BA8mL,，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,，加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0,。加入14g瓊脂，將鋁鍋置于電爐上,，攪拌加熱使瓊脂完全溶化,，然后用蒸餾水定容至終體積2L，繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中,。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎(chǔ)

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