采用Longa等的5級4分法標(biāo)準(zhǔn)對模型動物進(jìn)行評價，0分：無神經(jīng)功能缺損癥狀,；1分：出現(xiàn)左側(cè) Honer征,，輕度神經(jīng)功能缺損；2分：提尾對側(cè)前肢內(nèi)旋,，肩內(nèi)收,，中度神經(jīng)功能缺損；3分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈,、向?qū)?cè)傾倒,，重度神經(jīng)功能缺損；4分：不能自發(fā)行走,，部分意識喪失,。鼠側(cè)傾倒,，評分為3分。 沿腦橋上界面切斷,，去除嗅球,，稱全腦重，立即放入-20℃冰箱,， 20 min 后取出,，由前向后做連續(xù)冠狀切片（切片厚度2 mm）。將腦切片置入0.1% TTC溶液中,，后放入恒溫振蕩器中,，37℃避光染色30 min，將腦切片取出后放入固定液中固定 24 h,，取出腦片,，相機拍照，用 Motic Images Plus 顯微圖像分析系統(tǒng)計算腦梗死面積和梗死體積,。動物疾病模型的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化非常重要,，因為這可以確保研究結(jié)果的可重復(fù)性和可比性.南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究

腦卒中具有發(fā)病率高、病死率高,、殘疾率高及復(fù)發(fā)率高的特點,。其中缺血性腦卒中的發(fā)病率高于出血性腦卒中，占腦卒中總數(shù)的 60% ～ 70%,。缺血性腦卒中引起的組織損傷是主要的致死原因,，但研究發(fā)現(xiàn)，缺血后再灌注引起的過量氧自由基是造成組織損傷的主要因素,。 通過制備腦局部缺血再灌注損傷動物模型研究腦缺血再灌注損傷的作用機制已成為國內(nèi)外的研究熱點,。線栓法是*常用的腦局部缺血再灌注損傷模型制備方法，此方法不需要開顱且不需要呼吸機等儀器輔助,，缺血部位較恒定,，能夠準(zhǔn)確控制缺血及再灌注時間，容易控制局部條件,，全身影響小,，是制作腦局部缺血再灌注損傷模型*理想的方法。南京定制腦梗MCAO模型研究方案將動物放在一個旋轉(zhuǎn)的木棒上,，觀察動物是否能保持平衡,，以評估動物的平衡能力和協(xié)調(diào)性。

腦梗MCAO模型成功的評判方法 生物化學(xué)指標(biāo)的檢測：在實驗過程中,，檢測血清中C反應(yīng)蛋白（CRP）,、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等生物化學(xué)指標(biāo)的變化。這些指標(biāo)可以反映炎癥反應(yīng)和缺血損傷的程度，有助于評估模型的成功,。 病理學(xué)檢查：實驗結(jié)束后,，對實驗動物的大腦進(jìn)行病理學(xué)檢查。觀察大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)的細(xì)胞形態(tài),、排列情況,，評估神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度。同時,，通過免疫組化染色法檢測神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）的表達(dá),，以評估神經(jīng)元損傷的程度。 行為學(xué)評估：在實驗過程中,，對實驗動物進(jìn)行行為學(xué)評估,，如Morris水迷宮實驗、步態(tài)分析等,。通過比較不同處理組的行為學(xué)表現(xiàn),，評估模型的成功。 綜上所述,，評判腦梗MCAO模型成功的標(biāo)準(zhǔn)包括腦梗死面積,、神經(jīng)功能缺損評分、梗死血管,、生物化學(xué)指標(biāo)、病理學(xué)檢查和行為學(xué)評估等方面,。只有當(dāng)這些指標(biāo)均符合預(yù)期結(jié)果時,，才能認(rèn)為模型制備成功。

大腦中動脈閉塞(Middle cerebral artery occlusion,，MCAO)是缺血性腦血管病的重要類型,，是顱內(nèi)動脈粥***的晚期。部分患者在疾病進(jìn)展過程中可能形成間接代償,，但如果代償不足,，則可能發(fā)生短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)，甚至腦卒中,。在患有腦卒中的人群中,，大概有三分之一的患者會發(fā)生死亡，腦卒中的高致死率與其復(fù)雜的發(fā)病機制密切相關(guān)據(jù)統(tǒng)計,，我國己逐漸成為腦卒中的多發(fā)國家,，且新發(fā)腦卒中患者有逐年增加的趨勢。腦卒中己成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,，不僅給國家和家庭造成了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)還給患者帶來嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)和勞動能力的喪失,。小鼠缺血性腦梗死模型在神經(jīng)科學(xué)研究中具有重要意義。

將小鼠進(jìn)行呼吸誘導(dǎo)麻醉（異氟烷）后，以仰臥位固定于操作臺上,，繼續(xù)維持麻醉,，常規(guī)消毒，備皮,，取頸部正中切口,，分離右側(cè)頸部總動脈（CCA）、勁內(nèi)動脈（ICA）和頸外動脈（ECA）,，結(jié)扎ECA遠(yuǎn)心端,，在ECA起始端留置結(jié)扎線，用動脈夾將ICA遠(yuǎn)心端,、CCA近心端夾閉,。在ECA遠(yuǎn)心端結(jié)扎線外離斷，將ECA拉至與ICA成一條直線,，于結(jié)扎線近端用顯微剪剪一斜口,，將MACO栓線緩緩送入，栓線通過ECA近心端結(jié)扎線進(jìn)入ICA后,，單道結(jié)扎ECA近心端結(jié)扎線,，使栓線與血管相對固定，隨即松開ICA上的動脈夾,，緩慢上提ECA近心端結(jié)扎線,，將栓線緩慢送入，進(jìn)線至線栓刻度位置,。 缺血后再灌注：栓線插入40 min后拔出,，隨后將ECA近心端結(jié)扎線結(jié)扎，松開CCA近心端動脈夾,，碘伏消毒后逐層縫合切口,。小鼠缺血性腦梗死模型也為神經(jīng)康復(fù)研究提供了有力支持。南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究

缺血性腦梗死具有高發(fā)病率,、高死亡率,、高致殘率的特點。南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究

缺血性卒中的病理生理及藥物治*缺血性卒中主要誘發(fā)神經(jīng)血管單元（NVU）一系列的缺血級聯(lián)反應(yīng)（包括興奮性氨基酸毒性,，氧（氮）化應(yīng)激和缺血后炎癥等）,，從而造成神經(jīng)細(xì)胞受損甚至部分死亡細(xì)胞凋亡，*終誘發(fā)大腦功能的異常,。NVU是由神經(jīng)元,，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，血管細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞,、周細(xì)胞,、平滑肌細(xì)胞）以及基底膜共同構(gòu)成,，這些細(xì)胞相互作用，共同調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)在細(xì)胞間質(zhì)間的流動和腦血流,，維持和修復(fù)髓鞘,，清*代謝產(chǎn)物，從而實現(xiàn)和維持大腦的正常功能,。在缺血發(fā)生時,，NVU的各部分細(xì)胞發(fā)生不同程度的損傷，誘發(fā)神經(jīng)元細(xì)胞的生理生化異常,。部分凋亡細(xì)胞會進(jìn)展為梗死灶,，而梗死灶周圍受損的神經(jīng)細(xì)胞雖然出現(xiàn)了生理生化異常和功能障礙，但尚未死亡,，及時低灌注可能可以改善其損傷狀況使之恢復(fù)正常,。這部分及時搶救仍然可以改善其功能的神經(jīng)細(xì)胞一般被稱為“缺血半暗帶”。南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究