倒平板:滅菌溶化的培養(yǎng)基冷卻到50℃左右后,倒入無(wú)菌干燥的培養(yǎng)皿中,。培養(yǎng)基的溫度不能過(guò)高,,否則容易在培養(yǎng)皿的內(nèi)蓋上形成太多的冷凝水;溫度太低,,培養(yǎng)基又容易凝固成塊,,無(wú)法制成平板。倒平板時(shí),,應(yīng)在靠近酒精燈火焰進(jìn)行,,以免外界的雜菌落入平板內(nèi),左手拿培養(yǎng)皿,,右手拿三角瓶的底部,,用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下,灼燒瓶口,,用大拇指和食指把培養(yǎng)皿蓋打開(kāi)一條縫,,至瓶口剛好伸入,倒入培養(yǎng)基,,以鋪滿(mǎn)底為限,,不超過(guò)培養(yǎng)皿高度的三分之一,迅速蓋好蓋,,放在桌面上,,輕輕地轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基分布均勻,,冷凝后即可,。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng):兩個(gè)存儲(chǔ)器;存儲(chǔ)器高度可選。湖北全自動(dòng)分裝機(jī)
培養(yǎng)基的分裝:培養(yǎng)基的分裝,,應(yīng)按使用的目的和要求,,分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi),。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3,。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者),。分裝時(shí)較好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器,。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí),分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌,。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌,,以為測(cè)定該批培養(yǎng)基較終pH之用,。湖北全自動(dòng)分裝機(jī)分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí),分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng),。
配制好的培養(yǎng)基保存:滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度,,避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過(guò)度滅菌,,影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果,。所配制的培養(yǎng)基的量,應(yīng)該是在較長(zhǎng)保存期限內(nèi)正好使用完,。含染料的培養(yǎng)基應(yīng)閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完,,應(yīng)于冷藏保存,如果保存時(shí)間超過(guò)2天,,應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類(lèi)培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過(guò)2個(gè)星期,,應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。
培養(yǎng)基防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng):確認(rèn)工作細(xì)胞庫(kù)是否被污染,,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,,均可用細(xì)菌,、病菌及支原體無(wú)菌試驗(yàn)來(lái)確認(rèn)并排除。同時(shí)要對(duì)無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證,。實(shí)際生產(chǎn)中,,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時(shí)即可觀察有無(wú)污染,。其它:高壓滅菌設(shè)備,、過(guò)濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,確保滅菌和除菌效果;前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個(gè)月進(jìn)行驗(yàn)證,,后者應(yīng)在每次除菌前,、后進(jìn)行驗(yàn)證工作(至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次)。另外,,應(yīng)將有毒區(qū)與無(wú)毒區(qū)嚴(yán)格分開(kāi),,并有各自自立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對(duì)無(wú)毒區(qū)應(yīng)保持相對(duì)負(fù)壓,,防止病毒對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞(尤其是細(xì)胞庫(kù))的污染。液體培養(yǎng)基在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周?chē)?,形成透過(guò)養(yǎng)分的壁障,,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。
培養(yǎng)基的配制:分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用,。三角瓶:若作靜置培養(yǎng),,則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,很多不能超過(guò)150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,,否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),,則15~20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,,保證通氣良好。試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4~5ml,,約試管的1/4高度,;固體斜面培養(yǎng)基一般裝3~4ml,約試管的1/5高度,。包扎:分裝好后,,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,,防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕,。滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,。如果滅菌的溫度太高,,營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞,培養(yǎng)基中的糖,、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深,。擺斜面:滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個(gè)斜面,,約占試管長(zhǎng)度的1/2,。貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置,無(wú)污染的即可使用,。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用,。培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。湖北全自動(dòng)分裝機(jī)
液體培養(yǎng)基具有進(jìn)行通氣培養(yǎng),、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn),。湖北全自動(dòng)分裝機(jī)
培養(yǎng)基的種類(lèi):培養(yǎng)基種類(lèi)很多,根據(jù)配制原料的來(lái)源可分為自然培養(yǎng)基,、合成培養(yǎng)基,、半合成培養(yǎng)基,;根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基,、半固體培養(yǎng)基,;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基,、加富培養(yǎng)基,、鑒別培養(yǎng)基等;根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基,、放線菌培養(yǎng)基,、酵母菌培養(yǎng)基、病菌培養(yǎng)基等,。培養(yǎng)基,,是指供給微生物、植物或動(dòng)物(或組織)生長(zhǎng)繁殖的,,由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì),、無(wú)機(jī)鹽(包括微量元素),、維生素和水等幾大類(lèi)物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),,也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境,。湖北全自動(dòng)分裝機(jī)
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