開發(fā)一種新藥的過程可能是漫長、復(fù)雜和不確定的，但從社會(huì),、科學(xué)和經(jīng)濟(jì)的角度來看，它也可能是高回報(bào)的,。高通量篩選(HTS)已經(jīng)成為藥物發(fā)現(xiàn)的主要工具,。，向大家介紹目前用于靶標(biāo)確認(rèn)的幾種HTS方法,，主要分為兩大類:生化水平和細(xì)胞水平,。生化水平分析包括比率熒光法（FA/FP）,、熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）、時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)等,；細(xì)胞水平的分析包括細(xì)胞活力,、報(bào)告基因、第二信使和高內(nèi)涵成像等,。生化篩選利用純化的目標(biāo)蛋白,，在體外測定配體的結(jié)合或酶活性的抑制。這些檢測通常在384孔板中以競爭的形式進(jìn)行,，其中所研究的化合物必須取代已知的配體或底物,。熒光法由于其使用簡便、靈敏度高和靈活性強(qiáng)等特點(diǎn),，廣受科研人員的歡迎,，主要有比率熒光法（FA/FP）、熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）,、時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET),。高通量篩選的原理是什么。重慶新型高通量篩選

正如之前提到,，在高通量篩選中Assay的檢出方法有很多,，用于衡量酶活性多的當(dāng)屬于熒光檢出法和吸光度檢出法。這兩種方法都能非常便捷的與高通量進(jìn)行匹配,。但是這兩種檢出方法也有不適用的場景,，比如吸光度檢出法，在終點(diǎn)法測定（endpointassay）時(shí),，如果化合物庫的吸收低于~410nm,，實(shí)驗(yàn)的背景吸收會(huì)引入假陽性（false-positive）和假陰性（false-negative）結(jié)果。雖然假陽性結(jié)果可以通過動(dòng)力學(xué)Assay或者驗(yàn)證Assay來解決,，但是由于微量定量板有位于340~410nm的強(qiáng)吸收,，所以仍舊會(huì)導(dǎo)致Z因子降低，直接結(jié)果就是較弱活性的苗頭化合物將很難被篩選出來,。而對于熒光檢出法而言,，自發(fā)熒光化合物庫或者具有光敏特性的化合物庫同樣會(huì)遇到假陽性和假陰性結(jié)果。在某種程度上,，選擇合適的檢出方法可以減少甚至避免上述問題，比如使用更長波段的光源,，對于熒光檢出來說,，>500nm會(huì)是比較好的選擇。上海霉菌高通量篩選高內(nèi)涵高通量篩選系統(tǒng),。

高通量篩選作為主流的篩選技術(shù),，已得到了的應(yīng)用,。其他篩選技術(shù)，比如組合庫(CombinatorialLibrary)和碎片化合物庫(FragmentLibrary)篩選技術(shù)運(yùn)用也相當(dāng),，只是相較而言運(yùn)用較少,。另外，基于DNA編碼化合庫（DEL）技術(shù)的篩選文獻(xiàn)報(bào)道也不多見,，并且大都發(fā)表于2016年之后,，很多研究工作仍處于待發(fā)表狀態(tài)。正如2018年Brown和Bostr?m所指出,，TheJournalofMedicinalChemistry上所報(bào)道的66個(gè)臨床化合物,，就有1個(gè)是出自于DNA編碼化合物庫技術(shù)。

離子通道是目前藥物發(fā)現(xiàn)的重要靶點(diǎn),。例如在心血管疾病中,，離子通道檢測可以應(yīng)用于原發(fā)性電障礙(長QT綜合癥、短QT綜合癥,、Brugada綜合癥)等方面的藥物篩選,。以NovelKCNQ2channelactivatorsdiscoveredusingfluorescence-basedandautomatedpatch-clamp-basedhigh-throughputscreeningtechniques一文為例，通過一種改進(jìn)的高通量篩選技術(shù),，篩選新型KCNQ2通道劑,。在這篇文獻(xiàn)中，作者團(tuán)隊(duì)以ZTZ240(KCNQ2通道劑)作為陽性對照,，通過鉈通量測定法從80000種化合物篩選出了565個(gè)比ZTZ240更強(qiáng)活性的化合物,。然后使用384孔自動(dòng)化膜片鉗，進(jìn)一步篩選出了38個(gè)KCNQ2通道劑,。,，使用傳統(tǒng)的膜片鉗表征劑，得到ZG1732和ZG2083(EC50分別為1.04μM和1.37μM),。高通量篩選微生物技術(shù),。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是指在兩個(gè)不同的熒光基團(tuán)中，如果一個(gè)熒光基團(tuán)（供體Donor）的發(fā)射光譜與另一個(gè)基團(tuán)（受體Acceptor）的吸收光譜有一定的重疊,，當(dāng)這兩個(gè)熒光基團(tuán)間的距離合適時(shí),，就可觀察到熒光能量由供體向受體轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，即以前一種基團(tuán)的激發(fā)波長激發(fā)時(shí),，可觀察到后一個(gè)基團(tuán)發(fā)射的熒光,。常見的供體-受體對之間的有效距離通常為2-6nm，適用于許多蛋白質(zhì)相互作用,。染料通常是有機(jī)分子,，如與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的熒光素和羅丹明，或與感興趣的蛋白質(zhì)融合的熒光蛋白,。高通量篩選的藥物特點(diǎn),。重慶新型高通量篩選

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然而傳統(tǒng)的針對單一靶點(diǎn)的研究方法已經(jīng)難以適應(yīng)一些多基因疾病和病毒等相關(guān)藥物的研究。而基于細(xì)胞水平的高內(nèi)涵篩選(high content screening, HCS)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對化合物多靶點(diǎn)多參數(shù)的同時(shí)檢測,，從疾病相關(guān)基因調(diào)控通路和網(wǎng)絡(luò)水平上研究藥物的作用機(jī)制,、代謝途徑和潛在毒性等，也使在細(xì)胞水平評價(jià)活性化合物的成成為可能,。從篩選載體上看,，HCS和HTS并沒有的區(qū)別，它的檢測體積并未因檢測指標(biāo)增加而增高,，操作步驟同樣簡單可行,、可自動(dòng)化。故HCS在新藥研發(fā)中發(fā)揮越來越重要的作用,。重慶新型高通量篩選