熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是指在兩個(gè)不同的熒光基團(tuán)中，如果一個(gè)熒光基團(tuán)（供體Donor）的發(fā)射光譜與另一個(gè)基團(tuán)（受體Acceptor）的吸收光譜有一定的重疊,，當(dāng)這兩個(gè)熒光基團(tuán)間的距離合適時(shí),，就可觀察到熒光能量由供體向受體轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，即以前一種基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)激發(fā)時(shí),，可觀察到后一個(gè)基團(tuán)發(fā)射的熒光,。常見的供體-受體對(duì)之間的有效距離通常為2-6nm，適用于許多蛋白質(zhì)相互作用,。染料通常是有機(jī)分子,，如與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的熒光素和羅丹明，或與感興趣的蛋白質(zhì)融合的熒光蛋白,。全自動(dòng)高通量篩選工作站,。黑龍江菌株高通量篩選

高通量篩選是藥物研發(fā)的一個(gè)重要手段，然而研究中發(fā)現(xiàn)一些化合物在不同類型靶點(diǎn)篩選中均表現(xiàn)出陽性結(jié)果，這類化合物稱為“頻繁命中化合物”（Frequent hitters）,。根據(jù)篩選結(jié)果的有效性,，頻繁命中化合物可以大致分為兩類，一是能與許多不同類型靶點(diǎn)成鍵結(jié)合的混亂化合物（Promiscuous compound）,；二是通過干擾實(shí)驗(yàn)條件而在多個(gè)實(shí)驗(yàn)中呈現(xiàn)出陽性結(jié)果的假陽性化合物（False positive）,。雖然混亂化合物可能成為多藥理作用的研究起點(diǎn)，但考慮其低選擇性容易與其他蛋白發(fā)生反應(yīng)從而導(dǎo)致潛在的毒副作用,，因此這類化合物通常不作為新藥物研發(fā)的優(yōu)先,；而假陽性化合物產(chǎn)生機(jī)制較為復(fù)雜，根據(jù)現(xiàn)有的研究主要可以分為：膠體聚集化合物,、自熒光化合物,、熒光酶抑制劑和化學(xué)易反應(yīng)化合物,。黑龍江菌株高通量篩選如何實(shí)現(xiàn)快速高通量篩選,。

高通量篩選初是伴隨組合化學(xué)而產(chǎn)生的一種藥物篩選方式。1990年代末,，組合化學(xué)的出現(xiàn)改變了人類獲取新化合物的方式,，人們可以通過較少的步驟在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)合成大量化合物，在這樣的背景下高通量篩選的技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生,。高通量篩選技術(shù)可以在短時(shí)間內(nèi)對(duì)大量候選化合物完成篩選,，經(jīng)過發(fā)展，已經(jīng)成為比較成熟的技術(shù),，不僅應(yīng)用于對(duì)組合化學(xué)庫的化合物篩選,，還更多地應(yīng)用于對(duì)現(xiàn)有化合物庫的篩選。世界各大藥物生產(chǎn)商都建立有自己的化合物庫和高通量篩選機(jī)構(gòu),，對(duì)有潛力形成藥物的化合物進(jìn)行篦梳式的篩選,。

為了避免頻繁命中化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾，許多實(shí)驗(yàn)方法,，例如采用qHTS,、ADP-Glo等更先進(jìn)高通量篩選方法，或者采用交互實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證等用于增強(qiáng)篩選結(jié)果可行度,。此外,，隨著更多晶體結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)分享和生物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)庫整理，頻繁命中化合物的探索變得更加可行,。為人熟知且使用的就是PAINS（Pan-assay interference compounds）篩選規(guī)則,。這是Baell等人在2010年基于六個(gè)不同靶點(diǎn)高通量篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并將其中頻繁出現(xiàn)（≥4次）的化合物和相關(guān)結(jié)構(gòu)總結(jié)為包含480個(gè)子結(jié)構(gòu)的篩選規(guī)則,。但這類規(guī)則主要針對(duì)的是化學(xué)易反應(yīng)化合物,，且PAINS規(guī)則本身也有很大局限性，因此，頻繁命中化合物相關(guān)篩選預(yù)測(cè)工具的開發(fā)仍然是現(xiàn)今研究熱點(diǎn),。在2017年,，一篇由九名美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)雜志主編聯(lián)名發(fā)表的文章“The Ecstasy and Agony of Assay Interference Compounds”中強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)干擾引起的假陽性化合物的危害，告誡研究人員對(duì)篩選得出的陽性結(jié)果真實(shí)性需要反復(fù)確認(rèn),，對(duì)潛在的假陽性結(jié)果需要提高警惕,。為了更深入的了解頻繁命中化合物和相關(guān)機(jī)制。細(xì)胞水平高通量篩選,。

在1985年之前,，先導(dǎo)物的篩選主要是通過人工進(jìn)行的，每周處理的樣本數(shù)量不過幾百個(gè),，組合化學(xué)的出現(xiàn)使得科學(xué)家們獲取化合物的方式發(fā)生了變化,，他們可以在短時(shí)間內(nèi)合成大量化合物。更重要的是,，隨著分子生物學(xué)和功能基因組的研究發(fā)展,，使得新穎靶標(biāo)大量增加，這種情況下,，緩慢的人工篩選已經(jīng)沒有辦法滿足新藥研發(fā)的要求,，高通量篩選技術(shù)的出現(xiàn)縮短了先導(dǎo)物開發(fā)在藥物發(fā)現(xiàn)中的時(shí)間。如今,，一個(gè)普通的藥學(xué)高通量篩選實(shí)驗(yàn)室每天篩選的靶標(biāo)已經(jīng)超過10萬個(gè),。細(xì)胞高通量篩選技術(shù)。黑龍江菌株高通量篩選

高通量篩選技術(shù)的應(yīng)用,。黑龍江菌株高通量篩選

熒光素和羅丹明等有機(jī)染料的壽命約為3-4ns,，它們?cè)谶B接到分子量在0.5-10kDa范圍內(nèi)的生物分子時(shí)為敏感?；诩?xì)胞水平的篩選的關(guān)鍵特征之一是可以一次篩選多個(gè)靶標(biāo),。基于細(xì)胞的篩選常用于以下情況下：1)所需的分子靶標(biāo)未知,，2)靶標(biāo)無法在生化測(cè)定中充分重組,，3)所需的表型只存在于細(xì)胞環(huán)境中，例如從一種細(xì)胞類型分化到另一種細(xì)胞類型,?；诩?xì)胞的檢測(cè)貫穿于藥物發(fā)現(xiàn)的所有階段：靶標(biāo)選擇和驗(yàn)證、初步篩選,、先導(dǎo)化合物識(shí)別,、先導(dǎo)化合物優(yōu)化以及安全和毒理學(xué)篩選。介紹一些細(xì)胞水平分析的方法：細(xì)胞活力,、報(bào)告基因,、第二信使和高內(nèi)涵成像等,。黑龍江菌株高通量篩選

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