新一代微型化雙光子熒光顯微鏡體積小,，重只2.2克，適于佩戴在小動(dòng)物頭部顱窗上,，實(shí)時(shí)記錄數(shù)十個(gè)神經(jīng)元,、上千個(gè)神經(jīng)突觸的動(dòng)態(tài)信號(hào),。在大型動(dòng)物上，還可望實(shí)現(xiàn)多探頭佩戴,、多顱窗不同腦區(qū)的長(zhǎng)時(shí)程觀測(cè),。相比單光子激發(fā)，雙光子激發(fā)具有良好的光學(xué)斷層,、更深的生物組織穿透等優(yōu)勢(shì),，其橫向分辨率達(dá)到0.65μm，成像質(zhì)量與商品化大型臺(tái)式雙光子熒光顯微鏡可相媲美,，遠(yuǎn)優(yōu)于目前領(lǐng)域內(nèi)主導(dǎo)的,、美國(guó)腦科學(xué)計(jì)劃重要團(tuán)隊(duì)所研發(fā)的微型化寬場(chǎng)顯微鏡。采用雙軸對(duì)稱(chēng)高速微機(jī)電系統(tǒng)轉(zhuǎn)鏡掃描技術(shù),，成像幀頻已達(dá)40Hz（256*256像素）,，同時(shí)具備多區(qū)域隨機(jī)掃描和每秒1萬(wàn)線的線掃描能力。此外,，采用自主設(shè)計(jì)可傳導(dǎo)920nm飛秒激光的光子晶體光纖,，該系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了微型雙光子顯微鏡對(duì)腦科學(xué)領(lǐng)域較廣泛應(yīng)用的指示神經(jīng)元活動(dòng)的熒光探針（如GCaMP6）的有效利用。同時(shí)采用柔性光纖束進(jìn)行熒光信號(hào)的接收,，解決了動(dòng)物的活動(dòng)和行為由于熒光傳輸光纜拖拽而受到干擾的難題,。未來(lái)，與光遺傳學(xué)技術(shù)的結(jié)合,，可望在結(jié)構(gòu)與功能成像的同時(shí),，精細(xì)地操控神經(jīng)元和神經(jīng)回路的活動(dòng)。優(yōu)勢(shì)來(lái)源于其雙光子光源的非線性光學(xué)效應(yīng),。國(guó)內(nèi)熒光激光雙光子顯微鏡廠家有哪些

隨著技術(shù)的發(fā)展,，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化，結(jié)合它的特點(diǎn),，大致可以分成深和活兩個(gè)方面的提升,。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面，大致可從兩個(gè)方面入手,，裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造,。關(guān)于裝置優(yōu)化，我們可以把激光束變得更細(xì),，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深。關(guān)于標(biāo)本,，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,，解決這個(gè)問(wèn)題，我們需要對(duì)樣本進(jìn)行透明化處理。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡,，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解,。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解，進(jìn)而讓標(biāo)本“透明度”提高,。國(guó)內(nèi)ultima雙光子顯微鏡價(jià)位雙光子顯微鏡能夠進(jìn)行光裂解,、光轉(zhuǎn)染和光損傷等光學(xué)操縱。

TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作且無(wú)需維護(hù)的激光系統(tǒng),。其輸出波長(zhǎng)為920nm,，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)（如GFP，eGFP,，Eosin，GCaMP,，CFP,，Calcein或者Venus）的雙光子激發(fā)。能給熒光基團(tuán)提供比較高的峰值功率,，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光有關(guān)的生物光子學(xué)學(xué)科,。而且其獨(dú)特設(shè)計(jì)（制造簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)高效的光源）對(duì)雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的革新具有潛在的可能。在雙光子顯微鏡中,，峰值功率就是亮度,！如果您希望獲得比較好的圖像亮度，那么你就需要短脈沖,，高功率,，較重要的是需要干凈的時(shí)間脈沖形狀。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,，較短的脈沖和獨(dú)特的Clean-Pulse技術(shù),，以及具有相對(duì)比較高的峰值功率，使得其在雙光子顯微鏡中可以實(shí)現(xiàn)****的亮度,，而不會(huì)對(duì)樣品造成不必要的加熱,。FemtoFiberultra920交鑰匙，完全集成的色散補(bǔ)償（可確保樣品處的脈沖較短）,，內(nèi)置的功率控制,，操作直觀以及其堅(jiān)固而緊湊的設(shè)計(jì)，使該系統(tǒng)具有極為友好的用戶(hù)體驗(yàn),，是非線性顯微鏡應(yīng)用的較好解決方案,。例如熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對(duì)比機(jī)制。

首先我們來(lái)簡(jiǎn)單介紹一下激光掃描共聚焦和雙光子這兩種當(dāng)紅的顯微成像技術(shù),。激光掃描共聚焦顯微技術(shù),，是熒光顯微成像的一種，用于激發(fā)樣品的熒光信號(hào)并對(duì)其放大成像。在激光掃描共聚焦顯微鏡中,，樣品焦平面上每一時(shí)刻只有一個(gè)點(diǎn)被激發(fā)光照射,，縱然焦平面外也有激發(fā)光照射，但通過(guò)探測(cè)器前的（pinhole）,，有焦平面上的熒光信號(hào)能被探測(cè)器接收,。也就是說(shuō)，每個(gè)時(shí)刻,，只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號(hào)被探測(cè),。通過(guò)點(diǎn)掃描的方式，一個(gè)個(gè)點(diǎn)的信號(hào)就可以組合出終的圖像,。雙光子顯微鏡（包括多光子顯微鏡）同樣采用點(diǎn)掃描的方式得到圖像,。不同的是，其采用的激發(fā)光波長(zhǎng)較長(zhǎng),，只有當(dāng)兩個(gè)（或更多）激發(fā)光光子幾乎同時(shí)轟擊熒光探針的時(shí)候才可能激發(fā)出熒光信號(hào),。所以只有在光子密度特別大的焦點(diǎn)，出才會(huì)激發(fā)出熒光,。也就是說(shuō),，雙光子顯微鏡中，同樣每個(gè)時(shí)刻只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號(hào)被探測(cè),，并且連焦平面外的熒光信號(hào)也不會(huì)有,。雙光子顯微鏡有哪些應(yīng)用呢？

雙光子顯微鏡是一種先進(jìn)的成像技術(shù),，可以在保持細(xì)胞活性的情況下,，對(duì)深層組織進(jìn)行高分辨率成像。它主要用于生物學(xué),、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域的研究,。雙光子顯微鏡的重心技術(shù)是基于雙光子激發(fā)的熒光成像。當(dāng)激光通過(guò)樣品時(shí),，它會(huì)吸收特定波長(zhǎng)的光子,，然后發(fā)出熒光。雙光子顯微鏡使用兩個(gè)連續(xù)的光子同時(shí)激發(fā)樣品,，這樣可以在保持樣品完整性的同時(shí),，獲得高質(zhì)量的圖像。雙光子顯微鏡具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.高分辨率：由于雙光子激發(fā)的特性,，它可以獲得比傳統(tǒng)顯微鏡更高的分辨率,。2.深層成像：由于激光的穿透深度限制，傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡無(wú)法對(duì)深層組織進(jìn)行成像,。而雙光子顯微鏡可以解決這個(gè)問(wèn)題,，因?yàn)樗梢约ぐl(fā)樣品的深層熒光。3.活細(xì)胞成像：雙光子顯微鏡可以在保持細(xì)胞活性的情況下進(jìn)行成像，這對(duì)于研究細(xì)胞生理學(xué)和生物化學(xué)過(guò)程非常有用,。4.多模式成像：雙光子顯微鏡可以結(jié)合多種技術(shù),，如光譜成像、鈣離子成像和神經(jīng)活動(dòng)成像等,，以提供更豐富的生物樣品信息,。總之,，雙光子顯微鏡是一種強(qiáng)大的研究工具,，可以對(duì)深層組織和活細(xì)胞進(jìn)行無(wú)損成像。這使得它在生物學(xué),、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域的研究中具有廣泛的應(yīng)用,。雙光子顯微鏡可精確穿透較厚標(biāo)本進(jìn)行定點(diǎn)、有生命體的觀察,！布魯克雙光子顯微鏡應(yīng)用是什么

雙光子顯微鏡在各領(lǐng)域研究中已有許多成功實(shí)例,。國(guó)內(nèi)熒光激光雙光子顯微鏡廠家有哪些

雙光子顯微鏡的基本原理是：在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時(shí)吸收2個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子,，在經(jīng)過(guò)一個(gè)很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時(shí)間后，發(fā)射出一個(gè)波長(zhǎng)較短的光子,；其效果和使用一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的,。雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，為了不損傷細(xì)胞,，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量，其脈沖寬度只有100飛秒,，而其周期可以達(dá)到80至100兆赫茲,。在使用高數(shù)值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時(shí)，物鏡的焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的,，雙光子激發(fā)只發(fā)生在物鏡的焦點(diǎn)上,，所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦，提高了熒光檢測(cè)效率,。國(guó)內(nèi)熒光激光雙光子顯微鏡廠家有哪些