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WinfriedDenk較初使用的光源是染料飛秒激光器(100fs脈寬、630nm可見光波長),。雖然染料激光器對于實(shí)驗室演示尚可,，但是使用很不方便所以遠(yuǎn)未實(shí)現(xiàn)商用。很快雙光子顯微鏡的標(biāo)配光源就變成了飛秒鈦寶石激光器,。除了固態(tài)光源優(yōu)勢，鈦寶石激光器還具有較寬的近紅外波長調(diào)諧范圍,，而近紅外相比可見光穿透更深,，對生物樣品損傷更小。下圖是Thorlabs的雙光子和三光子顯微鏡配置,，鈦寶石飛秒可調(diào)諧激光器位于平臺較左邊,。科學(xué)家正在從雙光子轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡,。1996年,，ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk同導(dǎo)師實(shí)驗室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡，如果雙光子吸收可行,，那么三光子看起來也是自然的發(fā)展方向,。三光...

微型化雙光子熒光顯微成像改變了在自由活動動物中觀察細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的方式，可用于在動物覓食,、哺乳,、跳臺、打斗,、嬉戲,、睡眠等自然行為條件下，長時程觀察神經(jīng)突觸,、神經(jīng)元,、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),、遠(yuǎn)程連接的腦區(qū)等多尺度、多層次動態(tài)變化,。該成果在2016年底美國神經(jīng)科學(xué)年會,、2017年5月冷泉港亞洲腦科學(xué)專題會議上報告后，得到包括多位諾貝爾獎獲得者在內(nèi)的國內(nèi)外神經(jīng)科學(xué)家的高度贊譽(yù),。冷泉港亞洲腦科學(xué)專題會議,、美國明顯神經(jīng)科學(xué)家加州大學(xué)洛杉磯分校的AlcinoJSilva教授在評述中寫道，“從任何一個標(biāo)準(zhǔn)來看,，這款顯微鏡都了一項重大技術(shù)發(fā)明,，必將改變我們在自由活動動物中觀察細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的方式。它所開啟的大門,，甚至超...

在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收兩個長波長的光子，然后發(fā)射出一個波長較短的光子,，其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的（如下圖）,。如煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH），在單光子激發(fā)時,，在波長為350nm光的激發(fā)下發(fā)出450nm熒光,；而在雙光子激發(fā)時，可采用750nm的激發(fā)光得到450nm熒光,。由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，為了不損傷細(xì)胞，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,，從而可以減少光漂白和光毒性帶來的不利影響。雙光子顯微鏡在生物醫(yī)學(xué)研究中有廣泛的應(yīng)用,，可以觀察細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),、蛋白質(zhì)分布、細(xì)胞活動...

隨著技術(shù)的發(fā)展,，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化,，結(jié)合它的特點(diǎn),，大致可以分成深和活兩個方面的提升,。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面，大致可從兩個方面入手,，裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造,。關(guān)于裝置優(yōu)化，我們可以把激光束變得更細(xì),，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深。關(guān)于標(biāo)本，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,，解決這個問題,，我們需要對樣本進(jìn)行透明化處理。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡,，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解,。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解，讓標(biāo)本“透明度”提高,。雙光子顯微鏡為什么穿透能力強(qiáng)?激光熒光雙光子顯微鏡商家雙光子顯微鏡是一種先進(jìn)的成像技術(shù),，能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞或組織的深層觀察。它的主要特點(diǎn)是使...

配合雙光子激發(fā)技術(shù),，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢,？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級，經(jīng)過一個很短的時間后,，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）,。利用這個原理，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù),。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光,，通過物鏡匯聚，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的,，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā)，產(chǎn)生熒光,，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再次穿過物鏡,，被光探頭接收，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果,。雙光子顯微鏡明日之星--FemtoFiber ultra 920 ,。美國激光雙...

共聚焦顯微可以呈現(xiàn)這么漂亮的圖像，是不是什么樣品都可以用共聚焦顯微鏡拍拍拍.....得到各種各樣清晰漂亮的圖像呢,？答案是否定的,，任何事物都有優(yōu)缺點(diǎn)，何況一臺儀器呢,，共聚焦顯微鏡也是有自己的局限,共聚焦有哪些局限呢：1.共聚焦顯微鏡只能拍攝約200um以內(nèi)的的樣品,，對于厚的或者樣品不能進(jìn)拍攝；2.共聚焦顯微鏡由于是逐點(diǎn)進(jìn)行掃描,，對樣品的光毒性還是比較大的,，特別是拍攝活細(xì)胞樣品時就更容易對樣品進(jìn)行淬滅,；3.由于光照射的區(qū)域幾乎能通過這個Z軸的層面，所以對于空間定點(diǎn)光刺激的實(shí)驗定點(diǎn)位置就不是特別精確,；并且激光共聚焦顯微鏡沒有純紫外進(jìn)行激發(fā),，對于一些特殊激發(fā)波長的實(shí)驗，效率非常低,。雙光子顯微鏡還可以對...

基因編碼的熒光探針可用于在突觸和細(xì)胞分辨率下監(jiān)測體內(nèi)神經(jīng)元信號,，這是揭示動物神經(jīng)活動復(fù)雜機(jī)制的關(guān)鍵。雙光子顯微鏡(2PM)可以對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器進(jìn)行亞細(xì)胞分辨率的成像,，從而測量不透明腦深部的活動,。成像膜的電壓變化可以直接反映神經(jīng)元的活動，但神經(jīng)元活動的速度對于常規(guī)的2PM來說太快了,。目前,，電壓成像主要由寬視場顯微鏡實(shí)現(xiàn)，但其空間分辨率較差,，且只能在淺深度成像,。因此，為了以高空間分辨率成像不透明腦中膜電壓的變化,，需要將成像速率提高2PM,。面向模塊輸出端的子脈沖序列可視為從虛擬光源陣列發(fā)出的光，這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成空間分離和時間延遲的聚焦陣列,。然后,，該模塊被集成到一個帶有高...

TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作且無需維護(hù)的激光系統(tǒng)。其輸出波長為920nm,，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)（如GFP,，eGFP，Eosin,，GCaMP,，CFP，Calcein或者Venus）的雙光子激發(fā),。能給熒光基團(tuán)提供比較高的峰值功率,，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光有關(guān)的生物光子學(xué)學(xué)科。而且其獨(dú)特設(shè)計（制造簡單且經(jīng)濟(jì)高效的光源）對雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的革新具有潛在的可能,。在雙光子顯微鏡中,，峰值功率就是亮度！如果您希望獲得比較好的圖像亮度,，那么你就需要短脈沖,，高功率,，較重要的是需要干凈的時間脈沖形狀,。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,，較...

而配合了雙光子激發(fā)技術(shù)，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么,，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,，經(jīng)過一個很短的時間后，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）,。利用這個原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù)。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光,，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的,，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡,，從而被光探頭接收,，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果。雙光子顯微鏡已延伸到各個領(lǐng)域研究中,，它能對樣品進(jìn)行三維觀察,。進(jìn)口雙光子顯...

配合雙光子激發(fā)技術(shù)，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么,，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,，經(jīng)過一個很短的時間后，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）,。利用這個原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù)。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光,，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的,，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡,，被光探頭接收,，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果,。雙光子顯微鏡可以進(jìn)行厚的組織樣品拍攝。國內(nèi)熒光激光雙光子顯微鏡光刺激生物樣品的三...

配合雙光子激發(fā)技術(shù),，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢,？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級，經(jīng)過一個很短的時間后,，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）,。利用這個原理，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù),。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光,，通過物鏡匯聚，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的,，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā)，產(chǎn)生熒光,，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再次穿過物鏡,，被光探頭接收，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果,。雙光子顯微鏡不需要共聚焦細(xì)孔,，提高了熒光檢測效率。進(jìn)口熒光雙光子顯微鏡聯(lián)系方式...

隨著技術(shù)的發(fā)展,，雙光子顯微鏡的性能不斷優(yōu)化,。結(jié)合其特點(diǎn)，大致可以分為兩個方面:深入和主動改進(jìn),。為了使激發(fā)激光進(jìn)入更深的層次,，可以從器件優(yōu)化和標(biāo)本改造兩個方面入手。關(guān)于器件的優(yōu)化,，我們可以把激光束做得更細(xì),，集中能量，讓激光穿透得更深,。對于樣品,，物質(zhì)的吸收和散射是影響光傳播的主要因素。為了解決這個問題,，我們需要將樣本透明化,。一種方法是用某種物質(zhì)浸泡標(biāo)本，使其中的物質(zhì)(主要是脂質(zhì))被破壞或溶解。另一種方法是通過電泳電解脂類,，從而提高標(biāo)本的“透明度”,。雙光子顯微鏡的應(yīng)用中，該如何選擇以及更好的使用PMT,。美國ultimainvestigator雙光子顯微鏡商家配合雙光子激發(fā)技術(shù),，激光共聚掃描顯微鏡則能...

首先我們來簡單介紹一下激光掃描共聚焦和雙光子這兩種當(dāng)紅的顯微成像技術(shù),。激光掃描共聚焦顯微技術(shù),，是熒光顯微成像的一種，用于激發(fā)樣品的熒光信號并對其放大成像,。在激光掃描共聚焦顯微鏡中,，樣品焦平面上每一時刻只有一個點(diǎn)被激發(fā)光照射，縱然焦平面外也有激發(fā)光照射,，但通過探測器前的（pinhole）,，有焦平面上的熒光信號能被探測器接收。也就是說,，每個時刻,，只有焦平面上一個點(diǎn)的信號被探測。通過點(diǎn)掃描的方式,，一個個點(diǎn)的信號就可以組合出終的圖像,。雙光子顯微鏡（包括多光子顯微鏡）同樣采用點(diǎn)掃描的方式得到圖像。不同的是,，其采用的激發(fā)光波長較長,，只有當(dāng)兩個（或更多）激發(fā)光光子幾乎同時轟擊熒光探針的時候才可能激發(fā)出熒光信...

2020年，臨研所,、病理科和科研處邀請北京大學(xué)王愛民副教授做了題目為“新一代微型雙光子顯微成像系統(tǒng)介紹及其在臨床醫(yī)療診斷”的學(xué)術(shù)報告,。學(xué)術(shù)報告由臨研所醫(yī)學(xué)實(shí)驗研究平臺潘琳老師主持。王愛民,，北京大學(xué)信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院副教授,，畢業(yè)于北京大學(xué)物理系，獲學(xué)士,、碩士學(xué)位,，后于英國巴斯大學(xué)物理系獲博士學(xué)位。該研究組研發(fā)的微型雙光子顯微鏡,，第1次在國際上獲得了小鼠大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸清晰穩(wěn)定的動態(tài)信號,，該成果獲得了2017年度“中國光學(xué)進(jìn)展”和“中國科學(xué)進(jìn)展”，并被NatureMethods評為2018年度“年度方法--無限制行為動物成像”,。目前,，該研究組正在研究新一代雙光子顯微成像技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用，為...

光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡本質(zhì)的區(qū)別在于,，光學(xué)顯微鏡：用的是可見光電子顯微鏡：用的是高頻電子射波有什么區(qū)別,，在于一個基本的原理,，光的衍射。,。,。光波是一個有趣的東西，其中有一項,，如果物體的體積小于光的波長,，光一般可以繞過去，不發(fā)生明顯變化,。也就是說,，有這個物體和沒這個物體，在這種情況下,，光是不會發(fā)生明顯改變的,。可見光的波長（肉眼）：380～780納米,，也就是,，如果比380納米還要小的東西，用光學(xué)顯微鏡,，無論你放大多少倍,，也是看不見的。因為光繞過去了,。,。。光的衍射為了克服這個問題,，科學(xué)家用波長更短的光去照射物體,，也是就被觀測物。比如10納米級的光,，這樣,，就能看到我們用肉眼無論如何都看不見的東西。這就是...

雙光子顯微鏡是激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)相結(jié)合的新技術(shù),。雙光子激發(fā)的基本原理是:在光子密度較高的情況下,，熒光分子可以同時吸收兩個波長較長的光子，經(jīng)過短暫的所謂激發(fā)態(tài)壽命后,，發(fā)射一個波長較短的光子,；效果和用波長為長波長一半的光子激發(fā)熒光分子是一樣的。雙(多)光子成像的優(yōu)點(diǎn)是具有更深的組織穿透深度,，紅外光可以在平面上探測到極限為1mm的組織區(qū)域,；因為信號背景比高，所以具有更高的對比度；由于激發(fā)體積小,，具有定點(diǎn)激發(fā),、光毒性小的特點(diǎn)；激發(fā)波長由紫外,、可見光調(diào)整為紅外激發(fā),，更加安全。雙光子顯微鏡的探測器,該怎么選用?美國ultimainvestigator雙光子顯微鏡授權(quán)公司配合雙光子激發(fā)技術(shù)...

基因編碼的熒光探針可用于在突觸和細(xì)胞分辨率下監(jiān)測體內(nèi)神經(jīng)元信號,，這是揭示動物神經(jīng)活動復(fù)雜機(jī)制的關(guān)鍵,。雙光子顯微鏡(2PM)可以對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器進(jìn)行亞細(xì)胞分辨率的成像，從而測量不透明腦深部的活動,。成像膜的電壓變化可以直接反映神經(jīng)元的活動,，但神經(jīng)元活動的速度對于常規(guī)的2PM來說太快了,。目前,，電壓成像主要由寬視場顯微鏡實(shí)現(xiàn)，但其空間分辨率較差,，且只能在淺深度成像,。因此，為了以高空間分辨率成像不透明腦中膜電壓的變化,，需要將成像速率提高2PM,。面向模塊輸出端的子脈沖序列可視為從虛擬光源陣列發(fā)出的光，這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成空間分離和時間延遲的聚焦陣列,。然后,，該模塊被集成到一個帶有高...

隨著技術(shù)的發(fā)展，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化,，結(jié)合它的特點(diǎn),，大致可以分成深和活兩個方面的提升。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面,，大致可從兩個方面入手,，裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造。關(guān)于裝置優(yōu)化,，我們可以把激光束變得更細(xì),，使能量更加集中，就能讓激光穿透更深,。關(guān)于標(biāo)本,，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射，解決這個問題,，我們需要對樣本進(jìn)行透明化處理,。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解,，讓標(biāo)本“透明度”提高,。顯微成像技術(shù)包含：雙光子顯微鏡、寬場熒光顯微鏡,、共聚焦顯微鏡,、全內(nèi)反射熒光顯微鏡等多種成像方式。ultimainvestigator雙...

從雙光子的原理和特點(diǎn),，我們可以清楚地得出雙光子的優(yōu)點(diǎn):☆光損傷小:由于雙光子顯微鏡采用可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,，因此該波段的光對細(xì)胞和組織的光損傷很小，適合長期研究,；☆穿透能力強(qiáng):與紫外光相比,，可見光和近紅外光的穿透能力更強(qiáng)，因此受生物組織散射的影響更小,，解決了生物組織深層物質(zhì)的層析成像問題,；☆高分辨率:由于雙光子吸收的截面很小，只能在焦平面很小的區(qū)域激發(fā)熒光,，雙光子吸收被限制在焦點(diǎn)處體積約為波長三次方的范圍內(nèi),；☆漂白區(qū)域小:由于激發(fā)只存在于交點(diǎn)處，焦點(diǎn)外的區(qū)域不會發(fā)生光漂白,；☆熒光收集率高:與共焦成像相比,，雙光子成像不需要濾光片(共焦)，提高了熒光收集率,，直接導(dǎo)致圖像對比度的提高,；☆圖像...

其實(shí)電子顯微鏡相比于光學(xué)顯微鏡的重要優(yōu)勢或者存在的比較大意義，準(zhǔn)確的來說,，不在于放大倍數(shù),，而在于超高的分辨率。這兩者是不同的,。通俗的來說,，就是進(jìn)行觀察的時候，除了要將物體放大,，還需要能將它與相鄰的其他物體分辨開來,。如果兩個相鄰微粒的圖像在光學(xué)顯微鏡下，即使放大到很大,，看到的可能卻是兩個相交的亮斑（艾里斑）,，而沒有明顯的界限（更不用說細(xì)節(jié)了），這表示是分辨率不夠,。拋開分辨率談放大倍數(shù)是沒有意義的,。光學(xué)顯微鏡的分辨率極限是阿貝極限,，約等于光波波長的一半，通常被說成是光學(xué)顯微鏡放大極限,，其實(shí)準(zhǔn)確地來說,，應(yīng)該叫做分辨率的極限。而其產(chǎn)生的原因是光的衍射,，根本原因是光的波粒二象性,。電子衍射實(shí)驗證明了電子的...

通過對顯微光學(xué)系統(tǒng)的重新設(shè)計，將FHIRM-TPM2.0的成像視場擴(kuò)展至420×420平方微米,，顯微物鏡的工作距離擴(kuò)展至1mm,，實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)成像。嵌入可拆卸的快速軸向掃描模塊,，實(shí)現(xiàn)深度180微米的三維體成像和多平面快速切換的實(shí)時成像,。該模塊由一個快速電動變焦鏡頭和一對中繼鏡頭組成，在不同深度成像時保持放大率恒定,。其中,，變焦模塊重1.8克，科研人員可以根據(jù)實(shí)驗要求自由拆卸,。此外,，新型微型成像探頭可以瞬間插拔,，極大簡化了實(shí)驗操作,，避免了長時間實(shí)驗對動物的干擾。反復(fù)裝卸探針追蹤同批神經(jīng)元時,，視場旋轉(zhuǎn)角度小于0.07弧度,，邊界偏差小于35微米。雙光子顯微鏡將得到更大的發(fā)展與更廣的應(yīng)用,。國內(nèi)布魯克雙光子顯微...

從雙光子的原理和特點(diǎn)我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點(diǎn)：☆光損傷?。河捎陔p光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源，這一波段的光對細(xì)胞和組織的光損傷小,，適用于長時間的研究,；☆穿透能力強(qiáng)：相對于紫外光，可見光和近紅外光都具有更強(qiáng)的穿透能力,，因而受生物組織散射的影響更小,，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題；☆高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光,，雙光子吸收局限于焦點(diǎn)處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi)；☆漂白區(qū)域?。河捎诩ぐl(fā)只存在于交點(diǎn)處,，所以焦點(diǎn)以外的區(qū)域都不會發(fā)生光漂白現(xiàn)象,；☆熒光收集率高：與共聚焦成像相比，雙光子成像不需要光學(xué)濾波器（共焦）,，這樣就提...

隨著技術(shù)的發(fā)展,，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化，結(jié)合它的特點(diǎn),，大致可以分成深和活兩個方面的提升,。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面，大致可從兩個方面入手,，裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造,。關(guān)于裝置優(yōu)化，我們可以把激光束變得更細(xì),，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深。關(guān)于標(biāo)本,，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,，解決這個問題，我們需要對樣本進(jìn)行透明化處理,。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡,，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解,，讓標(biāo)本的“透明度”提高,。上海雙光子顯微鏡就找因斯蔻浦。ultima2PPLUS雙光子顯微鏡的成像視野從雙光子的原理和特點(diǎn)我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點(diǎn)：☆...

新一代微型化雙光子熒光顯微鏡體積小,，重只2.2克,，適于佩戴在小動物頭部顱窗上，實(shí)時記錄數(shù)十個神經(jīng)元,、上千個神經(jīng)突觸的動態(tài)信號,。在大型動物上，還可望實(shí)現(xiàn)多探頭佩戴,、多顱窗不同腦區(qū)的長時程觀測,。相比單光子激發(fā)，雙光子激發(fā)具有良好的光學(xué)斷層,、更深的生物組織穿透等優(yōu)勢,，其橫向分辨率達(dá)到0.65μm，成像質(zhì)量與商品化大型臺式雙光子熒光顯微鏡可相媲美,，遠(yuǎn)優(yōu)于目前領(lǐng)域內(nèi)主導(dǎo)的,、美國腦科學(xué)計劃重要團(tuán)隊所研發(fā)的微型化寬場顯微鏡。采用雙軸對稱高速微機(jī)電系統(tǒng)轉(zhuǎn)鏡掃描技術(shù),，成像幀頻已達(dá)40Hz（256*256像素）,，同時具備多區(qū)域隨機(jī)掃描和每秒1萬線的線掃描能力,。此外，采用自主設(shè)計可傳導(dǎo)920nm飛秒激光的光子晶體光...

雙光子熒光顯微鏡是結(jié)合了激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新技術(shù),。雙光子激發(fā)的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子，在經(jīng)過一個很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時間后,，發(fā)射出一個波長較短的光子,；其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的。雙（多）光子成像優(yōu)勢在于,，具有更深的組織穿透深度,，利用紅外光，能夠在層面檢測極限達(dá)1mm的組織區(qū)域,；因信號背景比高,，而具有更高的對比度；因激發(fā)體積小,，具有定點(diǎn)激發(fā)的特性,，具有更少的光毒性；激發(fā)波長由紫外,、可見光調(diào)整為紅外激發(fā),，使其能夠更加安全。這種雙光子顯微鏡的視場是普通顯微鏡的10倍,。2PPLUS雙光子顯微鏡熒...

配合了雙光子激發(fā)技術(shù),，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效。那么什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢,？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級，經(jīng)過一個很短的時間后,，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）。利用這個原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù),。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光,，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡，被光探頭接收,，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果,。雙光子顯微鏡可精確穿透較厚標(biāo)本進(jìn)行定點(diǎn),、有生命體的觀察！美國investigat...

在國家自然科學(xué)基金委國家重大科研儀器研制專項《超高時空分辨微型化雙光子在體顯微成像系統(tǒng)》的支持下,，北京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所,、信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院、動態(tài)成像中心,、生命科學(xué)學(xué)院,、工學(xué)院聯(lián)合中國人民醫(yī)學(xué)科學(xué)院組成跨學(xué)科團(tuán)隊，歷經(jīng)三年多的協(xié)同奮戰(zhàn),，成功研制新一代高速分辨微型化雙光子熒光顯微鏡,，并獲取了小鼠在自由行為過程中大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸活動清晰、穩(wěn)定的圖像,。原始論文于5月29日在線發(fā)表于自然雜志子刊NatureMethods(IF25.3),，并已申請多項。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖光,，是通過物鏡匯聚的,。國外布魯克雙光子顯微鏡雙光子顯微鏡是一種先進(jìn)的成像技術(shù)，可以在保持細(xì)胞活性的情況下,，對深層組織進(jìn)行高分...

從雙光子到三光子：科學(xué)家正在從雙光子轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡,。1996年，ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk同導(dǎo)師實(shí)驗室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡,，如果雙光子吸收可行,，那么三光子看起來也是自然的發(fā)展方向。三光子成像使用更長的波長,，大約在1.3和1.7微米,，其成像深度也比雙光子更深，目前記錄約為2.2毫米,，人類大腦皮層厚約4毫米,。相比雙光子顯微鏡，三光子還要求以較低重頻使用更強(qiáng)和更短的激光脈沖,，而傳統(tǒng)的鈦寶石激光器難以達(dá)到這些要求,，但是對于摻鐿光纖飛秒光參量放大器則非常容易，比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA),。雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化,，結(jié)合它的特點(diǎn)，大致可以分成深和活兩個方面的提升,。進(jìn)...

從雙光子的原理和特點(diǎn)我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點(diǎn)：☆穿透能力強(qiáng)：相對于紫外光,，可見光和近紅外光都具有更強(qiáng)的穿透能力，因而受生物組織散射的影響更小,，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題,；☆高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光，雙光子吸收局限于焦點(diǎn)處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi),；☆漂白區(qū)域?。河捎诩ぐl(fā)只存在于交點(diǎn)處，所以焦點(diǎn)以外的區(qū)域都不會發(fā)生光漂白現(xiàn)象,；☆熒光收集率高：與共聚焦成像相比,，雙光子成像不需要光學(xué)濾波器（共焦），這樣就提高了對熒光的收集率,，而收集率的提高直接導(dǎo)致圖像對比度的提高,。雙光子顯微鏡還可以對一些具有雙光子特性的染料細(xì)胞進(jìn)行特定實(shí)驗；...

在國家自然科學(xué)基金委國家重大科研儀器研制專項《超高時空分辨微型化雙光子在體顯微成像系統(tǒng)》的支持下,，北京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所,、信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院、動態(tài)成像中心,、生命科學(xué)學(xué)院,、工學(xué)院聯(lián)合中國人民醫(yī)學(xué)科學(xué)院組成跨學(xué)科團(tuán)隊，歷經(jīng)三年多的協(xié)同奮戰(zhàn),，成功研制新一代高速分辨微型化雙光子熒光顯微鏡,，并獲取了小鼠在自由行為過程中大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸活動清晰、穩(wěn)定的圖像,。原始論文于5月29日在線發(fā)表于自然雜志子刊NatureMethods(IF25.3),，并已申請多項。于雙光子激發(fā)需要兩個光子同時到達(dá),，因此只有在焦點(diǎn)附近的樣品區(qū)域才會激發(fā),，從而實(shí)現(xiàn)三維成像和高分辨率。美國熒光激光雙光子顯微鏡商家第二代微型化雙光子熒光...