利用鈣成像技術(shù)記錄大腦活動(dòng)，隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展，神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況,。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,，其主要原理是將外源性熒光信號(hào)和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號(hào)的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，以此細(xì)胞的功能狀態(tài),。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,，從而判斷其功能活動(dòng)。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號(hào)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時(shí)間和空間上的傳遞穿梭,。有了鈣成像技術(shù),，原本悄無聲息的神經(jīng)活動(dòng)就變成了一幅斑斕閃爍的壯觀影像。哈爾濱超微顯微鈣成像inscopix

Anderson研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室雄性小鼠對(duì)雌性和雄性的攀爬行為可以通過是否存在超聲發(fā)聲（USV）來區(qū)分,。這些和更多的行為數(shù)據(jù)表明,，大多數(shù)雄性主導(dǎo)的攀爬是攻擊性的，盡管在極少數(shù)情況下可能是性行為,。研究人員調(diào)查了USV+和USV-攀爬是否使用相同或不同的下丘腦神經(jīng)基質(zhì),。通過使用Inscopix自由行為顯微鈣成像方法觀察內(nèi)側(cè)視前區(qū)（MPOA）或腹內(nèi)側(cè)下丘腦腹側(cè)細(xì)分（VMHvl）中雌jisu受體1(ESR1)陽性神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)在小鼠活動(dòng)中可以解碼出在USV+和USV-攀爬過程中神經(jīng)元活動(dòng)的獨(dú)特模式,。交叉光遺傳刺激表達(dá)ESR1和囊狀GABA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（VGAT）的MPOA神經(jīng)元,，可促進(jìn)USV+攀爬，并將雄性的定向攻擊轉(zhuǎn)換為USV攀爬,。北京神經(jīng)細(xì)胞鈣成像nVista鈣信號(hào)發(fā)揮著高度特異性的功能,。

可見光激發(fā)Ca2+熒光探針：與紫外光激發(fā)探針相比，可見光激發(fā)Ca2+探針具有更強(qiáng)的染料吸收性能,，對(duì)Ca2+變化水平檢測敏感度也更高,，能夠降低對(duì)活細(xì)胞的光毒性和樣品自發(fā)熒光以及光散射的干擾，且無光譜偏移,。較常使用的可見光激發(fā)Ca2+熒光探針有Fluo-3,，F(xiàn)luo-4，Rhod-2等,，同時(shí)他們也都是非比率型指示劑,。Fluo-3是較常用的可見光激發(fā)Ca2+熒光指示劑之一，是典型的的單波長指示劑,，比較大激發(fā)波長為506nm,，比較大發(fā)射波長為526nm。它與Ca2+結(jié)合之前幾乎無熒光，結(jié)合后熒光會(huì)增加60至100倍,，從而避免了細(xì)胞自身的熒光干擾,。實(shí)際檢測時(shí)推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為525～530nm（圖3）,。Fluo-3可以用在激光共聚焦顯微成像或流式細(xì)胞儀中,。它還有一個(gè)升級(jí)版本Fluo-4，在相同Ca2+濃度下信號(hào)更強(qiáng),。

鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA,，APTRA，BAPTA的衍生物,，它們可以結(jié)合鈣離子從而顯示一個(gè)光譜響應(yīng),，使研究者可以用熒光顯微鏡來觀察細(xì)胞內(nèi)的自由鈣的濃度。熒光顯微鏡可以使用普通的倒置熒光顯微鏡來進(jìn)行鈣信號(hào)的測定和成像,。并可結(jié)合電生理設(shè)備,、活細(xì)胞培養(yǎng)裝置等，適用于大強(qiáng)度,、廣范圍的鈣信號(hào)測定,。共聚焦顯微系統(tǒng)，共聚焦以激光為光源,，且可配備氬離子光源,，可以選擇可見光激發(fā)的鈣指示劑，進(jìn)行層掃,，相比普通熒光顯微鏡有更好的空間分辨率,。并且共聚焦除了配備大視野掃描鏡更可配置共振掃描振鏡，以滿足更高速成像應(yīng)用的需求,。雙光子顯微系統(tǒng)使用長波長來激發(fā)熒光指示劑,，具有較低的細(xì)胞毒性，也可適用于紫外激發(fā)的鈣指示劑,，且可獲得和單光子共聚焦系統(tǒng)類似的空間分辨率,。小結(jié)綜上可見，在研究鈣信號(hào)時(shí),，可結(jié)合樣品自身特點(diǎn)來選擇相應(yīng)的鈣指示劑,，并考慮既有的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，來確定具體的實(shí)驗(yàn)方案,。同時(shí)還需進(jìn)一步摸索實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的校正,、控制等多種影響因素，可獲得可靠的圖像及熒光定量數(shù)據(jù),。利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑,，將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來,。

鈣成像具有以下幾個(gè)優(yōu)勢：1.非侵入性：鈣成像技術(shù)可以在活物細(xì)胞或組織中進(jìn)行觀察，無需破壞細(xì)胞或組織的完整性,，因此是一種非侵入性的技術(shù),。2.高時(shí)空分辨率：鈣成像技術(shù)可以實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子的動(dòng)態(tài)變化,，具有較高的時(shí)空分辨率,。可以捕捉到鈣離子濃度的瞬時(shí)變化,，揭示細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的快速過程,。3.多樣性：鈣成像技術(shù)可以使用不同的熒光探針或基因工程技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同類型的細(xì)胞或組織進(jìn)行鈣成像,?？梢愿鶕?jù)需要選擇適合的探針或方法，擴(kuò)展應(yīng)用范圍,。4.可定量分析：通過鈣成像技術(shù)可以獲得熒光信號(hào)的強(qiáng)度,，可以進(jìn)行定量分析，了解鈣離子濃度的變化程度,?？梢酝ㄟ^比較不同條件下的鈣成像結(jié)果，研究因素對(duì)鈣離子信號(hào)的調(diào)控作用,。5.可應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域：鈣成像技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)等領(lǐng)域,?？梢匝芯可窠?jīng)元活動(dòng)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo),、細(xì)胞凋亡等生物過程,，有助于揭示生物學(xué)機(jī)制和疾病發(fā)生及發(fā)展的過程。綜上所述,，鈣成像技術(shù)具有非侵入性,、高時(shí)空分辨率、多樣性,、可定量分析和廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域等優(yōu)勢,，成為研究細(xì)胞內(nèi)鈣離子動(dòng)態(tài)變化的重要工具。鈣成像數(shù)據(jù)采集盒擁有 2TB 存儲(chǔ)空間,，可選擇以太網(wǎng)或 Wi? 方式連接電腦,。北京熒光顯微鈣成像哪個(gè)好

想要同時(shí)觀察軸突和樹突的鈣離子信號(hào)，大視野是很重要的,。哈爾濱超微顯微鈣成像inscopix

想要對(duì)鈣離子的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行有效的檢測,，鈣離子指示劑的選擇顯得尤為重要。鈣離子熒光指示劑在未結(jié)合鈣離子前幾乎無熒光，與鈣離子結(jié)合后,，熒光強(qiáng)度xianzhu增強(qiáng),。利用這一原理，可以通過指示劑的信號(hào)強(qiáng)弱來觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度水平的變化,。根據(jù)激發(fā)光波長范圍,，鈣離子指示劑可以分為可見光激發(fā)和紫外光激發(fā)，而根據(jù)其工作原理又可以分為比率和非比率型,。常見的鈣離子指示劑有以下幾種：紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針,、可見光激發(fā)Ca2+熒光探針、轉(zhuǎn)基因Ca2+指示劑,。哈爾濱超微顯微鈣成像inscopix