紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針Fura-2和Indo-1都是紫外光激發(fā)的雙波長Ca2+熒光指示劑，也是目前較常用的比率型鈣離子熒光探針,。與其他代的熒光指示劑相比,，它們的熒光信號更強,，對Ca2+的選擇性也更強,。比率指示劑會在與Ca2+結合后會改變吸收/發(fā)射特性,。以雙波長激發(fā)指示劑Fura-2為例。如圖2所示,，低Ca2+濃度下,，F(xiàn)ura-2在~380nm處激發(fā)，高Ca2+濃度下,，在~340nm處激發(fā),。光譜由兩個峰組成：左側較短波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而增大，右側較長波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而減小,。通過340/380nm交替激發(fā),，獲取在510nm處對應的發(fā)射光熒光強度的比率，就可以對Ca2+濃度進行定量的測量,。因為Fura-2結果準確,，且不易被漂白，所以得到了普遍使用,。鈣成像數(shù)據(jù)采集盒擁有 2TB 存儲空間,，可選擇以太網(wǎng)或 Wi? 方式連接電腦。江蘇超微顯微鈣成像多少錢

傳統(tǒng)的寬場熒光顯微鏡由于光散射的影響,，只能夠對大腦淺層的神經(jīng)元或在離體組織上進行成像,，共聚焦顯微鏡由于光損傷較大，一般也只用于離體鈣成像,。隨著熒光顯微鏡技術的迅速發(fā)展,，在體鈣成像技術得到了蓬勃發(fā)展。雙光子熒光顯微鏡能夠在進行在體成像的時候實現(xiàn)高分辨率和高信噪比,。例如,，用雙光子顯微鏡對海馬樹突棘的鈣離子信號進行成像，研究神經(jīng)元突觸后長時程降低(Wangetal.,2000),；觀察在體小鼠運動皮層神經(jīng)元在嗅覺選擇任務中刺激相關電位(Komiyamaetal.,2010)等等,。不過，這些實驗還是需要對動物進行麻醉和固定,，而神經(jīng)科學領域很多研究更希望能夠對自由活動的動物進行研究,。近年來出現(xiàn)了通過植入性的microscope或microlens進行在體freelymoving動物鈣成像的技術。使用一端帶有GRINlens的光纖連接顯微鏡和動物大腦,，從特定腦區(qū)發(fā)出的熒光信號被光纖收集,，然后通過Inscopix顯微鏡成像。動物頭部只需植入GRINlens,，方便活動,。江蘇超微顯微鈣成像多少錢鈣成像技術利用鈣離子流的優(yōu)勢在活神經(jīng)細胞上直接可視化鈣信號,。

麻省理工學院和波士頓大學的研究人員近研究使用一種熒光探針，能夠在大腦細胞處于電活動狀態(tài)時點亮,，可以立即對小鼠大腦中多個神經(jīng)元的活動進行成像,。麻省理工學院的腦科學和認知科學神經(jīng)技術教授、兼生物工程學教授EdwardBoyden表示,，只需要使用簡單的光學顯微鏡,，即可實現(xiàn)這項技術。神經(jīng)科學家可以將大腦內(nèi)電路的活動進行可視化,，并將其與特定行為聯(lián)系起來,。“如果想研究一種行為或疾病,，就需要對神經(jīng)元群體的活動進行成像,，讓這些神經(jīng)元群網(wǎng)絡中協(xié)同工作?！盉oyden說,。

一項由葡萄牙尚帕莫未知中心，牛津大學,，哥倫比亞大學,，荷蘭鹿特丹伊拉斯謨大學，麻省理工學院,，倫敦大學,，德國MaxPlanck生物控制論研究所，德國圖歐賓根大學多方合作的研究于2020年11月4日在Neuron上發(fā)表了題為TheAnteriorCingulateCortexPredictsFutureStatestoMediateModel-BasedActionSelection的文章,，作者通過一個新的兩步謎題任務了解基于模型的決策使用對行為具體后果的預測,，在小鼠的一系列決策任務中使用Inscopix顯微鈣成像和光遺傳學來證明前扣帶皮層（ACC）預測了行動將導致的狀態(tài)，而不僅*是預測它們是好是壞,，并判斷結果是否與這些預測相符,。研究結果表明，ACC是基于模型的控制的關鍵節(jié)點,，在預測所選操作的未來狀態(tài)方面發(fā)揮著特定作用,。想要同時觀察軸突和樹突的鈣離子信號，大視野是很重要的,。

在生物有機體,，鈣離子產(chǎn)生各種各樣的胞內(nèi)信號，這些胞內(nèi)信號幾乎在每種類型的細胞中都存在,，且在很多功能方面有重要作用,，例如對心肌細胞收縮的控制和從細胞增殖到細胞死亡整個細胞周期的調(diào)節(jié)等。在哺乳動物的神經(jīng)系統(tǒng)中,，鈣離子是一類重要的神經(jīng)元胞內(nèi)信號分子,。在靜息狀態(tài)下,，大部分神經(jīng)元的胞內(nèi)鈣離子濃度為50-100nM，而當神經(jīng)元活動的時候,，胞內(nèi)鈣離子濃度能上升10-100倍,，增加的鈣離子對于包含有神經(jīng)遞質的突觸囊泡的胞吐釋放過程必不可少。也就是說神經(jīng)元的活動與其內(nèi)部的鈣離子濃度密切相關,，神經(jīng)元在放電的時候會爆發(fā)出一個短暫的鈣離子濃度高峰,。神經(jīng)元鈣成像（calciumimaging）技術的原理就是借助鈣離子濃度與神經(jīng)元活動之間的嚴格對應關系,，利用特殊的熒光染料或者蛋白質熒光探針(鈣離子指示劑,，calciumindicator)，將神經(jīng)元當中的鈣離子濃度通過熒光強度表現(xiàn)出來,，從而達到檢測神經(jīng)元活動的目的,。細胞內(nèi)鈣成像技術是通過向細胞內(nèi)載入鈣指示劑。合肥inscopix鈣成像grain lens

對于鈣離子成像來說,，大多數(shù)情況下速度很重要,。江蘇超微顯微鈣成像多少錢

與傳統(tǒng)的單光子寬視野熒光顯微鏡相比，多光子顯微鏡（MPM）具有光學切片和深層成像等功能,，這兩個優(yōu)勢極大地促進了研究者們對于完整在體大腦深處神經(jīng)的了解與認識,。2019年，JeromeLecoq等人從大腦深處的神經(jīng)元成像,、大量神經(jīng)元成像,、高速神經(jīng)元成像這三個方面論述了相關的MPM技術。想要將神經(jīng)元活動與復雜行為聯(lián)系起來,，通常需要對大腦皮質深層的神經(jīng)元進行成像,，這就要求MPM具有深層成像的能力。激發(fā)和發(fā)射光會被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素,，雖然可以通過增加激光強度來解決散射問題,，但這會帶來其他問題，例如燒壞樣品,、離焦和近表面熒光激發(fā),。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長的波長作為激發(fā)光。江蘇超微顯微鈣成像多少錢