麻省理工學(xué)院和波士頓大學(xué)的研究人員近研究使用一種熒光探針,，能夠在大腦細(xì)胞處于電活動(dòng)狀態(tài)時(shí)點(diǎn)亮,，可以立即對(duì)小鼠大腦中多個(gè)神經(jīng)元的活動(dòng)進(jìn)行成像。麻省理工學(xué)院的腦科學(xué)和認(rèn)知科學(xué)神經(jīng)技術(shù)教授,、兼生物工程學(xué)教授EdwardBoyden表示,，只需要使用簡(jiǎn)單的光學(xué)顯微鏡,，即可實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)技術(shù)。神經(jīng)科學(xué)家可以將大腦內(nèi)電路的活動(dòng)進(jìn)行可視化,，并將其與特定行為聯(lián)系起來(lái),。“如果想研究一種行為或疾病,，就需要對(duì)神經(jīng)元群體的活動(dòng)進(jìn)行成像,，讓這些神經(jīng)元群網(wǎng)絡(luò)中協(xié)同工作?！盉oyden說(shuō),。鈣成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于同時(shí)監(jiān)測(cè)成百上千個(gè)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化。合肥鈣成像grain lens

使用MPM對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行鈣成像時(shí),，通過(guò)隨機(jī)訪問(wèn)掃描—即激光束在整個(gè)視場(chǎng)上的任意選定點(diǎn)上進(jìn)行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經(jīng)元,，這樣不僅避免掃描到任何未標(biāo)記的神經(jīng)纖維，還可以優(yōu)化激光束的掃描時(shí)間,。隨機(jī)訪問(wèn)掃描可以通過(guò)聲光偏轉(zhuǎn)器（AOD）來(lái)實(shí)現(xiàn),，其原理是將具有一個(gè)射頻信號(hào)的壓電傳感器粘在合適的晶體上，所產(chǎn)生的聲波引起周期性的折射率光柵,，激光束通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生衍射,。通過(guò)射頻電信號(hào)調(diào)控聲波的強(qiáng)度和頻率從而可以改變衍射光的強(qiáng)度和方向,，這樣使用1個(gè)AOD就可以實(shí)現(xiàn)一維橫向的任意點(diǎn)掃描，利用1對(duì)AOD,，結(jié)合其他軸向掃描技術(shù)可實(shí)現(xiàn)3D的隨機(jī)訪問(wèn)掃描,。但是該技術(shù)對(duì)樣本的運(yùn)動(dòng)很敏感，易出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)偽影,。目前,，快速光柵掃描即在FOV中進(jìn)行逐行掃描，由于利用算法可以輕松解決運(yùn)動(dòng)偽影而被guangfan的使用,。北京熒光鈣成像售后保障現(xiàn)在鈣成像技術(shù)使用的鈣離子指示劑主要有化學(xué)性鈣離子指示劑和基因編碼鈣離子指示劑,。

可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+熒光探針與紫外光激發(fā)探針相比，可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+探針具有更強(qiáng)的染料吸收性能,，對(duì)Ca2+變化水平檢測(cè)敏感度也更高,，能夠降低對(duì)活細(xì)胞的光毒性和樣品自發(fā)熒光以及光散射的干擾，且無(wú)光譜偏移,。常使用的可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+熒光探針有Fluo-3,，F(xiàn)luo-4，Rhod-2等,，同時(shí)他們也都是非比率型指示劑,。Fluo-3是常用的可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+熒光指示劑之一，是典型的的單波長(zhǎng)指示劑,，比較大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm,，比較大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。它與Ca2+結(jié)合之前幾乎無(wú)熒光,，結(jié)合后熒光會(huì)增加60至100倍,，從而避免了細(xì)胞自身的熒光干擾。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右,，發(fā)射波長(zhǎng)為525～530nm,。Fluo-3可以用在激光共聚焦顯微成像或流式細(xì)胞儀中。它還有一個(gè)升級(jí)版本Fluo-4,，在相同Ca2+濃度下信號(hào)更強(qiáng),。

細(xì)胞內(nèi)鈣離子作為重要的信號(hào)分子其作用具有時(shí)間性和空間性。當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞興奮時(shí),，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)電沖動(dòng),，在此時(shí)，細(xì)胞外的鈣離子回流入該細(xì)胞內(nèi),，促使這個(gè)細(xì)胞分泌神經(jīng)遞質(zhì),，神經(jīng)遞質(zhì)與相鄰的下一級(jí)神經(jīng)細(xì)胞膜上的蛋白分子相結(jié)合，促使這個(gè)一級(jí)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生新的電沖動(dòng),。以此類推,，神經(jīng)信號(hào)便一級(jí)一級(jí)地傳遞下去，從而構(gòu)成復(fù)雜的信號(hào)體系,，形成了學(xué)習(xí),、記憶等大腦的高級(jí)功能。在哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中,，鈣離子同樣扮演著重要的信號(hào)分子的角色,。小鼠頭戴式微型顯微鏡為后續(xù)清醒動(dòng)物腦功能鈣成像研究提供了一套可靠的顯微成像系統(tǒng)。

眾所周知,，只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,，而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定，同時(shí)也受鈣結(jié)合蛋白的影響,。細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,，其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體,、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時(shí)受體電位C型通道（TRPC）等,。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過(guò)熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái)，以反映神經(jīng)元活性,。該方法可以同時(shí)觀察多個(gè)功能或位置相關(guān)的腦細(xì)胞,。長(zhǎng)時(shí)間追蹤相同細(xì)胞，進(jìn)行可重復(fù)的科學(xué)研究對(duì)自由行為動(dòng)物進(jìn)行慢性鈣成像研究,。北京熒光鈣成像售后保障

鈣成像技術(shù)一出現(xiàn),，就受到了全世界神經(jīng)科學(xué)家們的追捧。合肥鈣成像grain lens

目前可用的指示劑較多,，根據(jù)熒光光譜,、與鈣離子親和力及其化學(xué)特性的不同大致分為化學(xué)性鈣離子指示劑和基因編碼鈣離子指示劑。前者指可特異性與鈣離子結(jié)合的小分子,，常用的有fura-2,、indo-1等；而后者主要指來(lái)源于綠色熒光蛋白GFP及其變異體的蛋白質(zhì),，可與鈣調(diào)蛋白和肌球蛋白輕鏈激酶M13域結(jié)合,，常用的有GCaMP、TN-XXL等,，其中GCaMP5G和GCaMP6被廣泛應(yīng)用于在體鈣成像研究中,。生物熒光蛋白：Aequorin是水母熒光素（coelenterazine）通過(guò)硫酸酯鍵或過(guò)氧化鍵緊緊連到脫輔水母發(fā)光蛋白上形成的，遇到鈣離子就發(fā)出470nm藍(lán)光,，可以作為鈣離子的檢測(cè)試劑,；化學(xué)鈣離子指示劑：Fura-2可在紫外光下被jihuo且發(fā)射出505-520nm光；基于FRET的基因編碼的鈣指示劑,；單個(gè)熒光基因編碼的鈣指示劑,。合肥鈣成像grain lens