指示劑是如何負(fù)載細(xì)胞,，目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法,，且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經(jīng)元中,。此方法方便實(shí)驗(yàn)者控制單個神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高,。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負(fù)載神經(jīng)元，觀察對象為一群神經(jīng)元,。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細(xì)胞也被指示劑所標(biāo)記,，但明顯提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比，使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動作電位相關(guān)性的活動,。第三種也較為常用,，通過病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。功能鈣成像技術(shù)是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來,，通過熒光染料信號的改變反映細(xì),。江蘇細(xì)胞鈣離子鈣成像nVoke

包含鈣離子指示劑的細(xì)胞可以通過熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)觀測，然后通過CCD攝像機(jī)捕捉、記錄圖像?，F(xiàn)在鈣成像技術(shù)主要在以下幾類神經(jīng)科學(xué)研究方面有廣泛應(yīng)用：1.記錄培養(yǎng)的神經(jīng)元的活動,。2.記錄腦片上神經(jīng)元的活動。記錄神經(jīng)元的活動,。由于離體實(shí)驗(yàn)本身的限制,，現(xiàn)在越來越多的神經(jīng)方面科學(xué)家傾向于做在體鈣成像實(shí)驗(yàn)，希望能得到更準(zhǔn)確且更能反應(yīng)生理狀況的數(shù)據(jù),。得益于雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,，現(xiàn)在在實(shí)驗(yàn)動物處于huoti狀態(tài)下的鈣成像技術(shù)取得了飛速進(jìn)展。4.記錄神經(jīng)元樹突和樹突棘（spine）的活動,。由于對于實(shí)驗(yàn)精度的要求,，有些科學(xué)家不僅只想記錄單個神經(jīng)元的反應(yīng)，他們還想更確切地知道神經(jīng)元上哪些樹突和樹突棘參與了某個行為,，也就是說他們需要在huoti條件下,，對單根樹突以及某些spine進(jìn)行鈣成像記錄實(shí)驗(yàn)。由于雙光子熒光顯微鏡和GCaMP6基因編碼鈣離子指示劑的發(fā)展,，現(xiàn)在,，對樹突和樹突棘用鈣成像實(shí)驗(yàn)進(jìn)行記錄也成為了可能。寧波細(xì)胞鈣離子鈣成像采購信息對于鈣離子成像來說,，大多數(shù)情況下速度很重要,。

鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA，APTRA,，BAPTA的衍生物,，它們可以結(jié)合鈣離子從而顯示一個光譜響應(yīng),，使研究者可以用熒光顯微鏡來觀察細(xì)胞內(nèi)的自由鈣的濃度,。熒光顯微鏡可以使用普通的倒置熒光顯微鏡來進(jìn)行鈣信號的測定和成像。并可結(jié)合電生理設(shè)備,、活細(xì)胞培養(yǎng)裝置等,，適用于大強(qiáng)度、廣范圍的鈣信號測定,。共聚焦顯微系統(tǒng),，共聚焦以激光為光源，且可配備氬離子光源,，可以選擇可見光激發(fā)的鈣指示劑,，進(jìn)行層掃，相比普通熒光顯微鏡有更好的空間分辨率,。并且共聚焦除了配備大視野掃描鏡更可配置共振掃描振鏡,，以滿足更高速成像應(yīng)用的需求。雙光子顯微系統(tǒng)使用長波長來激發(fā)熒光指示劑，具有較低的細(xì)胞毒性,，也可適用于紫外激發(fā)的鈣指示劑,，且可獲得和單光子共聚焦系統(tǒng)類似的空間分辨率。小結(jié)綜上可見,，在研究鈣信號時,，可結(jié)合樣品自身特點(diǎn)來選擇相應(yīng)的鈣指示劑，并考慮既有的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,，來確定具體的實(shí)驗(yàn)方案,。同時還需進(jìn)一步摸索實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的校正、控制等多種影響因素,，可獲得可靠的圖像及熒光定量數(shù)據(jù),。

傳統(tǒng)的寬場熒光顯微鏡由于光散射的影響，只能夠?qū)Υ竽X淺層的神經(jīng)元或在離體組織上進(jìn)行成像,，共聚焦顯微鏡由于光損傷較大,，一般也只用于離體鈣成像。隨著熒光顯微鏡技術(shù)的迅速發(fā)展,，在體鈣成像技術(shù)得到了蓬勃發(fā)展,。雙光子熒光顯微鏡能夠在進(jìn)行在體成像的時候?qū)崿F(xiàn)高分辨率和高信噪比。例如,，用雙光子顯微鏡對海馬樹突棘的鈣離子信號進(jìn)行成像,，研究神經(jīng)元突觸后長時程yizhi；觀察小鼠運(yùn)動皮層神經(jīng)元在嗅覺選擇任務(wù)中刺激相關(guān)電位等等,。不過,，這些實(shí)驗(yàn)還是需要對動物進(jìn)行麻醉和固定，而神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域很多研究更希望能夠?qū)ψ杂苫顒拥膭游镞M(jìn)行研究,。鈣離子成像可以追蹤神經(jīng)元動作電位,。

研究顯示NL189BLA神經(jīng)元通過投射到CEA來控制探索行為中動物的運(yùn)動速度和瞬時停滯。隨著進(jìn)一步的探索,，該神經(jīng)元群體的活性以經(jīng)驗(yàn)依賴性的方式增加,，而NL189BLA神經(jīng)元的暫時性功能喪失會導(dǎo)致瞬間停滯的yizhi，而且這些行為停滯與焦慮和恐懼無關(guān),。動物在這些停滯點(diǎn)開始和終止探索性旅程并在停滯后會改變頭部朝向和運(yùn)動軌跡方向,，因此在熟悉的位置進(jìn)行短暫停滯可能是替代性嘗試錯誤行為的決策。這些結(jié)果揭示杏仁核作為新穎性/熟悉性檢測器以及行為效應(yīng)器環(huán)路的共同作用,，其具有基于探索行為期間的空間經(jīng)驗(yàn)來驅(qū)動或yizhi自發(fā)運(yùn)動的能力,，這對于動物在自然界中安全有效的探索未知環(huán)境是十分必要的。專業(yè)的鈣成像顯微鏡使得鈣成像變的直接,。西安在體鈣成像哪里有

近年來出現(xiàn)了通過植入性的顯微鏡或透鏡進(jìn)行活動動物鈣成像的技術(shù),。江蘇細(xì)胞鈣離子鈣成像nVoke

現(xiàn)在有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法,，且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經(jīng)元中,。此方法方便實(shí)驗(yàn)者控制單個神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高,。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負(fù)載神經(jīng)元，觀察對象為一群神經(jīng)元,。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細(xì)胞也被指示劑所標(biāo)記,，但提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比，使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動作電位相關(guān)性的活動,。第三種也較為常用,，通過病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。（A）單細(xì)胞注射法,；（B）networkloading法,；（C）通過病毒轉(zhuǎn)染使其基因編碼鈣離子指示劑（expressionofgeneticallyencodedcalciumindicators,GECI）江蘇細(xì)胞鈣離子鈣成像nVoke