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湖北發(fā)展酵母文庫做什么

來源: 發(fā)布時間:2022-07-06

酵母雙雜交(Y2H):植物轉錄因子(Plant transcripter factors, TFs)是調控植物生長發(fā)育和環(huán)境適應性的關鍵分子。雖然在一些數據庫中,,如RiceSRTFDB (Priya and Jain,, 2013), Ricettissuetfdb (Chen et al.,,PlnTFDB (Pérez-Rodríguez et al.,, 2009)和PlantTFDB (Jin et al., 2017),,可以預測水稻轉錄因子功能,。但通過具體實驗研究,來直接證實轉錄因子對植物的調控作用仍然是必不可少的,。酵母雙雜交(Y2H)和酵母單雜交(Y1H)是被用于研究蛋白-蛋白以及蛋白-DNA互作的**常用技術,。為了方便和促進水稻育種研究,陳凡老師與歐易生物達成合作,,整合雙方優(yōu)勢資源,,歷經春秋與冬夏,成功構建了基于粳稻(日本晴)基因組的水稻轉錄因子文庫,。該項成果以“一種高效的篩選系統(tǒng)來鑒定大米轉錄因子的蛋白質-蛋白質或蛋白質-DNA相互作用伙伴”為題,,發(fā)表于雜志JGG上。從該技術開發(fā)以來,,雙雜交和三雜交報告基因數量從1個報告基因增加到了4個,,降低了假陽性概率。湖北發(fā)展酵母文庫做什么

酵母文庫:2021年11月,,山東農業(yè)大學園藝科學與工程學院張振魯團隊在MolecularPlantPathology(IF:5.663)發(fā)表了題為“Nitrate-inducibleMdBT2actsasarestrictionfactortolimitapplenecroticmosaicvirusgenomereplicationinMalusdomestica”的研究論文,,報道了MdBT2蛋白在抑制病毒ApNMV基因組RNA復制中的作用。文章中所用酵母文庫為歐易生物構建,。ApNMV與ApMV相似,,含有3種正義單鏈基因組RNAs:RNA1(編碼1a蛋白,后面你會經??吹剿?,對病毒復制至關重要),RNA2(編碼RNA聚合酶)和RNA3(編碼MP),,以及在3種RNA中排名第4的RNA4(編碼CP),。當然蘋果如何抵抗ApNMV的研究機制就更少了。湖北發(fā)展酵母文庫做什么博士期間長期從事酵母單/雙雜交文庫構建及篩選的工作,。

通過酵母雙雜篩選實驗,,進一步研究AaWRKY9蛋白功能,結果篩選到了與AaWRKY9互作的AaJAZ9蛋白,,并通過Y2H,、BiFC,、CoIP等進行了驗證確認。JAZs是JA介導的植物相應中的負向調控因子,,在毛狀體和老葉中高表達,,在芽尖和嫩葉中表達量低。為確認AaJAZ9是否抑制了AaWRKY9在促進青蒿素積累過程中的轉錄***功能,,通過雙熒光素酶報告基因檢測實驗發(fā)現(xiàn),,當AaWRKY9與AaJAZ9共表達時,其轉錄活性被抑制,,而使用MeJA處理后,,這種抑制作用被抵消,且AaWRKY9轉錄活性增強,,反向驗證實驗結果一致,。說明JA可以通過降解JAZ9,提高AaWRKY9轉錄活性,,促進青蒿素生物合成,。

酵母文庫研究:棉花是世界上天然纖維的主要來源。近年來,,氣候變化給植物帶來的干旱,、高鹽等滲透脅迫,使棉花產量穩(wěn)步下降,。為適應變化莫測的氣候,,植物不斷進化出復雜而有組織的應對非生物脅迫的反應機制,其中數千個抗性相關基因間的相互作用,,在提高植物的抗旱性和耐鹽性中發(fā)揮著重要作用,。功能基因組學研究表明,植物胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白(LEA)就是這樣一種基因,,它在植物發(fā)育過程中,,面對多種環(huán)境脅迫時均有表達,對提高植物的抗旱性和耐鹽性具有重要作用,。2022年3月,,中國農業(yè)科學院棉花研究所在國際期刊上發(fā)表了BiologicalMacromolecules上發(fā)表了題為“LateembryogenesisabundantgeneLEA3(Gh_A08G0694)enhancesdroughtandsaltstresstoleranceincotton”的研究論文,該研究發(fā)現(xiàn)LEA3能夠增強棉花的抗旱性和耐鹽性,。該項目中所用的棉花酵母文庫由歐易生物構建,。歐易生物是國內較早提供酵母雜交技術服務的生物公司,較早掌握Gateway和Smart兩種建庫方法,。

進行了酵母雙雜交文庫的篩選,,結果顯示鈣依賴的種子特異性蛋白激酶SPK可以與OsNF-YB9相互作用,分段截取互作驗證顯示OsNF-YB9的N端是互作所必須的(圖a-b),,并通過雙熒光分子互補實驗,、BiFC、體外GST-pulldown實驗得以證實(圖c-e),。亞細胞定位顯示SPK主要在細胞質中表達,,OsNF-YB9在細胞質和細胞核中都有表達,共表達SPK和OsNF-YB9***促進了OsNF-YB9的入核(圖f),,表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促進了OsNF-YB9從細胞質向細胞核的運輸,。RT-PCR顯示SPK在發(fā)育中的種子中高表達,在5DAF開始***,,并在10-30DAF維持高表達水平(圖a-b),。spk敲除突變體種子中堊白率的增加(圖c-e),但粒形和粒重與野生型沒有***差別,。篩選酵母文庫選歐易生物技術可靠服務高效多年經驗,。湖北發(fā)展酵母文庫做什么

初篩+復篩提高目標陽性克隆質粒精確度。一對一篩庫驗證服務,,客戶無需再次驗證,。湖北發(fā)展酵母文庫做什么

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