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黑龍江歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組做什么

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-19

高通量空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的處理和分析需要新穎的方法和工具支撐,尤其是在預(yù)處理、scRNA-seq 數(shù)據(jù)的空間重構(gòu),、基于微陣列數(shù)據(jù)的細(xì)胞類型去卷積、空間高變基因的識別,、細(xì)胞間相互作用的推導(dǎo)等,。scRNA-seq 技術(shù)的進(jìn)步啟發(fā)了利用高分辨率轉(zhuǎn)錄組定量分析與空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的互補(bǔ)性質(zhì)的新方法。對于未進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序的 smFISH 和 ISS 數(shù)據(jù),,可通過 scRNA-seq 數(shù)據(jù)估算空間數(shù)據(jù)中未分析的基因的表達(dá)模式,。此外,“空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)”這一術(shù)語的變體,,也用于描述將轉(zhuǎn)錄本定位到細(xì)胞器的技術(shù)(例如 APEX-seq),,盡管該技術(shù)沒有記錄任何空間坐標(biāo)??臻g轉(zhuǎn)錄組的條形碼逆轉(zhuǎn)錄oligo(dT)引物在顯微鏡載玻片表面的有序附著,。黑龍江歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組做什么

當(dāng)前的技術(shù)主要有四種策略:1、基于組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)合空間重建的計(jì)算策略,。這種計(jì)算方法可以充分利用內(nèi)在基因表達(dá)模式或共表達(dá)的趨勢,,從單個細(xì)胞的大量轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中重構(gòu)細(xì)胞間的環(huán)境。然而,,這些推論方法在某些情況下*呈現(xiàn)空間趨勢或特定組織的總體布局,。2,、激光切割與NGS測序結(jié)合的策略?;贚CM的轉(zhuǎn)錄組學(xué)或基因組學(xué)成功地獲得了單個細(xì)胞的空間轉(zhuǎn)錄組,,盡管其通量很低,但是在可以標(biāo)記成千上萬個單個細(xì)胞位置的多路復(fù)用條形碼策略可行之前,,將少量細(xì)胞的數(shù)據(jù)粗略地整合到構(gòu)成***的巨大背景中,,可能具有一定價(jià)值。3,、基于熒光物質(zhì)原位的轉(zhuǎn)錄組學(xué),。基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué)在很大程度上增加了可檢測區(qū)域,,但也存在一些問題,,例如幾種smFISH方法很難從包括信號干擾、轉(zhuǎn)錄本積累等復(fù)雜背景中提取單個細(xì)胞,。4,、基于寡核苷酸的空間條碼加上NGS測序。費(fèi)用較高且無法在單個細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)錄組,。四川歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組領(lǐng)域轉(zhuǎn)錄本的空間位置信息可以通過在原位陣列上捕獲的組織切片中的轉(zhuǎn)錄本來獲取,,?如空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)。

和單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組一樣,,空間轉(zhuǎn)錄組也可以進(jìn)行細(xì)胞間通訊分析,,區(qū)別在于空間位置信息可以同時(shí)用于識別潛在的細(xì)胞間相互作用。通常通過了解配體受體(LR)對并測試 LR 對是否更有可能在鄰近細(xì)胞或 spot 中表達(dá)來完成,。還有很多其他類型的分析可用于空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù),,包括基因模式的識別,空間區(qū)域的轉(zhuǎn)錄組定義,, 基因間的相互作用推斷,,轉(zhuǎn)錄本的亞細(xì)胞定位以及基于H&E圖像的基因表達(dá)估算等。1. 歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),,致力通過質(zhì)量的服務(wù),,助力各位科研工作者取得新的突破。

Visium空間轉(zhuǎn)錄組能夠做何種組織類型以及推薦切片厚度是什么,?10X Genomics測試過很多組織類型,,絕大多數(shù)都可以用于空間轉(zhuǎn)錄組的分析。下圖是他們官網(wǎng)上測試過的組織類型的列表,,測試過的組織都可以運(yùn)用在空間轉(zhuǎn)錄組的分析上面,。但建議用戶用基因表達(dá)玻片做正式實(shí)驗(yàn)前,務(wù)必用組織優(yōu)化的玻片測試一下,看組織能否用于空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn),,同時(shí)也找到比較好的組織通透時(shí)間。切片厚度基本上以10μm為主,,但也有少量組織例外,。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),致力通過質(zhì)量的服務(wù),,助力各位科研工作者取得新的突破,。盡管前傳時(shí)代的空間技術(shù)被迅速棄用,但其思想和方法是當(dāng)今時(shí)代空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ),。

空間轉(zhuǎn)錄組是在組織原位檢測基因表達(dá)的一種技術(shù),,與bulk RNA-seq或單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序相比,空間轉(zhuǎn)錄組避免了組織中細(xì)胞位置信息的丟失,,使得我們在檢測基因表達(dá)的同時(shí)獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息,。正是由于空間轉(zhuǎn)錄組可以從多維度解析生物學(xué)過程的特點(diǎn),近年來關(guān)于空間轉(zhuǎn)錄組無論是在技術(shù)開發(fā),,還是大規(guī)模應(yīng)用或商業(yè)化,,都得到蓬勃發(fā)展。例如2019年4月,,Science發(fā)文通過空間轉(zhuǎn)錄組揭示ALS(肌萎縮側(cè)索硬化癥,,又稱漸凍癥)分子病理的時(shí)空動態(tài);2019年8月,,Nature在線發(fā)表了景乃禾團(tuán)隊(duì)解析小鼠早期胚胎細(xì)胞的時(shí)空表達(dá)數(shù)據(jù),;2020年9月,Cell上發(fā)表了一篇利用空間轉(zhuǎn)錄組解析人鱗狀細(xì)胞*的文章,;2021年1月,,Science發(fā)表了將組織擴(kuò)展和原位RNA測序結(jié)合起來的新型空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)ExSeq;2021年4月,,10x Genomics公司宣布了新一代FFPE空間轉(zhuǎn)錄組商業(yè)化解決方案,。空間轉(zhuǎn)錄組使得我們在檢測基因表達(dá)的同時(shí)獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息,。四川歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組領(lǐng)域

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1. 空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟A,。切片制備和優(yōu)化:取新鮮組織,、冷凍、切片,,并進(jìn)行HE染色成像,,優(yōu)化確定切片是否覆蓋靶向區(qū)域。空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟B,。切片固定和透化:將組織切片放置在含有與RNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,,并進(jìn)行固定和透化,使細(xì)胞中的 mRNA 得到釋放,,并結(jié)合到相應(yīng)的捕獲探針上,,從而獲取基因表達(dá)信息??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟c,。逆轉(zhuǎn)和文庫構(gòu)建:以捕獲的 RNA 為模板,進(jìn)行 cDNA 合成,,和測序文庫制備,。空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟d,。高通量上機(jī)測序:對制備好的測序文庫,,進(jìn)行二代高通量短讀長測序??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟e,。數(shù)據(jù)可視化分析:結(jié)合HE結(jié)果,確定哪些基因有表達(dá),,表達(dá)量高低,,以及這些基因的空間位置信息。黑龍江歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組做什么

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