常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見的緩沖體系有：1,、弱酸和它的鹽（如HAc---NaAc）2、弱堿和它的鹽（NH3·H2O---NH4Cl）3,、多元弱酸的酸式鹽及其對應(yīng)的次級鹽（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。而生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸,、檸檬酸,、碳酸、醋酸,、巴比妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng),，生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽,、檸檬酸鹽,、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽,、如蔗糖,。檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用,。磷酸鹽：在有些實驗,，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來,。而且它在,。三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用,。其主要缺點時溫度效應(yīng)。這點往往被忽視,，在室溫pH是,，4℃時是,，37℃時是,，因此,，4℃配制的緩沖液在37℃進(jìn)行測量時,，其氫離子濃度就增加了10倍,。在，其緩沖能力極為不理想,。 緩沖液使用中的注意事項。北京緩沖液常用知識

    所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗,，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇,。3.苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機(jī)相,，因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到,，苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃，此時的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài),。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫,，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解,。②加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度。該化合物是一種還原劑,、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,，同時因其呈黃色,，有助于方便識別有機(jī)相,。③加入等體積的1MTris-HCl（)，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,，靜置使其充分分層后,，除去上層水相,。④重復(fù)操作步驟③,。⑤加入等體積的MTris-HCl（),，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后,，除去上層水相,。⑥重復(fù)操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相,。⑦使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于。⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存,。苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)配制方法：1.說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25:24:1),。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡,。河北有酚紅緩沖液生化實驗中加入緩沖液的目的和作用,。

    PBS緩沖液密度和水接近嗎?PBS緩沖液的密度與水接近。?PBS緩沖液，主要成分為Na2HPO4,、KH2PO4,、NaCl和KCl,，這些成分的密度與水的密度相近,。PBS緩沖液的作用主要是提供一個穩(wěn)定的pH環(huán)境,，用于保護(hù)生物化學(xué)研究中的試劑和細(xì)胞等,，同時保持實驗條件的穩(wěn)定性,。由于PBS緩沖液的主要成分與水的密度相近，它在水溶液中的行為也與水相似,，這使得PBS成為生物化學(xué)實驗中常用的溶液之一,。此外，PBS緩沖液可以調(diào)整其成分以適應(yīng)不同的pH值需求,，從而在***的pH范圍內(nèi)提供穩(wěn)定的緩沖能力?12,?？偟膩碚f,，PBS緩沖液的密度與水非常接近，這種特性使得PBS在生物化學(xué)研究中得到***應(yīng)用,，因為它能夠提供一個類似于水的環(huán)境,，同時保持實驗條件的穩(wěn)定性,。?PBS緩沖液的密度與水接近,。?PBS緩沖液,，主要成分為Na2HPO4,、KH2PO4、NaCl和KCl,，這些成分的密度與水的密度相近,。PBS緩沖液的作用主要是提供一個穩(wěn)定的pH環(huán)境,，用于保護(hù)生物化學(xué)研究中的試劑和細(xì)胞等，同時保持實驗條件的穩(wěn)定性,。由于PBS緩沖液的主要成分與水的密度相近,，它在水溶液中的行為也與水相似，這使得PBS成為生物化學(xué)實驗中常用的溶液之一,。此外,，PBS緩沖液可以調(diào)整其成分以適應(yīng)不同的pH值需求。

    測定PBS液的PH值約為,。磷酸鹽緩沖液取磷酸二氫鈉,，與磷酸氫二鈉,。磷酸鹽緩沖液()甲液:取磷酸，加水至1000ml,，搖勻,。乙液：取磷酸氫二鈉,，加水使溶解成1000ml,。取上述甲液,，搖勻，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸二氫鉀100g,，加水800ml,，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至,。磷酸鹽緩沖液()取，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸二氫鉀,，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸二氫鉀,，用水稀釋至100ml，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸二氫鈉,、磷酸氫二鈉,，加水使溶解成400ml,，即得。磷酸鹽緩沖液(含胰酶)()取磷酸二氫鉀；另取胰酶10g,，加水適量使溶解,，將兩液混合后,加水稀釋至1000ml，即得。磷酸鹽緩沖液()取,，加,，用水稀釋至1000ml,，搖勻，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸二氫鉀,，加，用水稀釋至100ml,，即得。磷酸鹽緩沖液()取,，加新沸過的冷水稀釋至200ml,，搖勻，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸氫二鈉,，調(diào)節(jié)pH值至，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸二氫鉀,，加，用水稀釋至200ml,，即得,。磷酸鹽緩沖液()取磷酸二氫鉀,，加水使溶解成1000ml，取50ml,，加,，再加水稀釋至200ml，即得,。磷酸鹽緩沖液()甲液：取磷酸氫二鈉，加水溶解,，并稀釋至500ml。乙液：取磷酸二氫鈉,，加水溶解，并稀釋至100ml,。取上述甲液,，搖勻,，即得。磷酸鹽緩沖液,。 在生物化學(xué)研究中,為什么要使用緩沖液?在使用緩沖液時應(yīng)注意那些問題?

    1:50～l:800)后，按行進(jìn)行包被,、洗滌,。按列分別加入用稀釋液1:100稀釋的強(qiáng)陽性,、弱陽性、陰性參考血清及稀釋液(作空白對照),，保溫，洗滌,。加工作濃度酶標(biāo)抗體，洗滌,，加底物顯色,，加酸終止反應(yīng)后讀取A值。選擇強(qiáng)陽性參考血清A值,；為0．8左右，陰性參考血清A值<0．1的包被抗原稀釋度為工作濃度,。?方陣(棋盤)法選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度將抗體用包被液稀釋為10mg／L,、lmg／L、／L三個濃度按行包被,，每一個濃度包被三行(每行3孔)，分別在每個濃度包被的***,、二、三行中分別加入強(qiáng)陽性抗原,，弱陽性抗原和陰性對照，將酶標(biāo)抗抗體用稀釋液稀釋為1:l000,、l:5000、l:10000三個濃度,，分別加入每個濃度包被的***、二,、三列中。加底物顯色,，加酸終止反應(yīng)，分別讀取A值,。以強(qiáng)陽性抗原液A值在，陰性參考A值<**適條件,。據(jù)此選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的**佳工作濃度。?二,、ELISA**適工作濃度的選擇及標(biāo)準(zhǔn)化操作1**適工作濃度的選擇?1．1間接法測抗體?????酶標(biāo)抗體工作濃度的選擇：①用IgG進(jìn)行包被,，洗滌。②將酶標(biāo)IgG用稀釋液作一系列稀釋后分別加入已包被的孔中,，保溫、洗滌,。③加酸終止反應(yīng)后,，讀取吸光度(A)。讀取A值在1．0時的酶標(biāo)抗體稀釋度,，作為酶標(biāo)抗體的工作濃度,。緩沖液濃度和溫度的影響。寧夏HBSS緩沖液技術(shù)指導(dǎo)

使用pH計可以更準(zhǔn)確地測量pH值的變化,，判斷是否為緩沖溶液,。北京緩沖液常用知識

PBS 與 DPBSPBS 和 DPBS 都包括氯化鈉和磷酸鹽緩沖液,，是生物學(xué)研究中常用的試劑,，用于維持 pH 值,，同時可大幅度地減少活細(xì)胞中的滲透壓休克,；然而，與 PBS 相比,，DPBS 還包括氯化鉀,，配方中可含或不含鈣和鎂以及含或不含葡萄糖和**酸,。根據(jù)您的具體應(yīng)用選擇 PBS 或 DPBS。

Dulbecco 的磷酸鹽緩沖液（DPBS）DPBS 與 PBS 的不同之處在于它還包括氯化鉀,，并且提供多種配方。它也用于生物應(yīng)用,，水基緩沖液，包括氯化鈉和磷酸鹽緩沖液,。

HBSS 與 EBSSHanks 的平衡鹽溶液（HBSS）和 Earle 的平衡鹽溶液（EBSS）都是等滲溶液,，用于維持生物應(yīng)用中的滲透壓和 pH 值。雖然 HBSS 和 EBSS 包括葡萄糖和碳酸氫鈉,，用于短期維持生長培養(yǎng)基以外的細(xì)胞,，但 EBSS 在 5% CO2 下使用,，而 HBSS 包含較少的碳酸氫鈉,，可以在沒有 CO2 的情況下使用,。從各種依應(yīng)用而定的配方中進(jìn)行選擇,。 北京緩沖液常用知識