第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗證消毒**在醫(yī)學(xué)實踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑,、控制***擴散造成的危害,;也可殺滅物品或器皿上的**,防止醫(yī)院***,;在醫(yī)學(xué)微生物檢驗的領(lǐng)域中,,消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗不受外來微生物污染的前提。(一)術(shù)語消毒(disinfection),、火菌(sterilization),、抑菌(bacteriostasis)、防腐(antisepsis)和無菌(asepsis)是常用術(shù)語,。下面就術(shù)語概念加以敘述,。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法,。本法適用于制劑,、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**,。(如外科器械,、注射器,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。)(2)消毒,。是破壞物體上活的病原微生物的方法,,但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計,、新潔爾滅液擦拭檢查臺等,。用于消毒的化學(xué)物品稱消毒劑(dis-infectant)。一般而言,,消毒對象是指物體而不是機體,。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法,。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚,、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無菌,。防止***病原體進入****或物品的操作技術(shù)稱無菌操作,。無菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力,、電離輻射,、超聲波、過濾等,。無血清培養(yǎng)基為細胞提供了無血清的純凈環(huán)境,。湖南F12培養(yǎng)基哪個好
4、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基,,其不含碘化鉀,,在絕大多數(shù)植物中,碘元素不是必需元素,,實驗發(fā)現(xiàn)去除碘化鉀對植物**培養(yǎng)沒有影響,,并且植物在脫離培養(yǎng)基進行后期培養(yǎng)時仍可以從土壤等基質(zhì)中富集碘元素,去掉碘化鉀成分,,也簡化了培養(yǎng)基配制過程,。5、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基,,其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o,,該替換減少的**根離子通過適當(dāng)增加**銨成分來補充,該替換主要基于兩個特征,,一方面,,nafeedta是可溶性螯合鐵,更容易被植物吸收,有利于植物葉綠體發(fā)育,,另一方面,,發(fā)明人發(fā)現(xiàn),na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms,、b5和n6等眾多植物**培養(yǎng)基原始ph偏低及ph波動大的主要原因,本發(fā)明培養(yǎng)基中使用nafeedta之后,,經(jīng)ph為,,而植物**適宜生長的ph一般為,因此,,使用nafeedta既促進了植物對鐵離子的吸收,,又有利于培養(yǎng)基ph的穩(wěn)定。6,、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基,,其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o,、h3bo3,、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量,,增加了cuso4·5h2o,、煙酸、鹽酸硫胺素,、鹽酸吡哆醇的用量,,該改變特征在于,有效減少愈傷**玻璃化發(fā)生,,減少酚類物質(zhì)產(chǎn)生,,提高愈傷**的出愈率,實驗發(fā)現(xiàn),,優(yōu)化后的培養(yǎng)基出愈時間提前,,對多種植物的愈傷**誘導(dǎo)是有益的。山東MEM a培養(yǎng)基供應(yīng)商家使用減血清培養(yǎng)基可以減少細胞培養(yǎng)中的血清干擾因素,。
二氧化碳不斷被釋放,,培養(yǎng)液變酸,pH值發(fā)生變化,。酚紅是細胞培養(yǎng)基中**常用的pH指示劑,,但依靠細胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進行判斷,需要實驗員的經(jīng)驗積累,,存在較大的主觀性,。實際上,個性化細胞培養(yǎng)基或是無血清細胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅,只能通過pH計或者pH電極進行pH值的檢測,,結(jié)果更為準確可靠,。緩沖能力細胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細胞培養(yǎng)過程中造成細胞培養(yǎng)液pH波動的主要物質(zhì)是細胞代謝產(chǎn)生的CO2,。在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸,,細胞培養(yǎng)液pH很快下降;打開培養(yǎng)器具時CO2逸出則會引起pH升高,。細胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng),,按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細胞培養(yǎng)基的pH值:H2O+CO2→H2CO3?H++HCO3-NaHCO3?Na++HCO3-此外,還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng),。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細胞毒性小,、成本低,在細胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為***,。另一種較為常用的緩沖液是HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)液,,它是一種非離子兩性緩沖液,在pH~,。高濃度的HEPES可能對細胞**性作用,,細胞培養(yǎng)時HEPES的添加濃度一般為10~25mmol/L。滲透壓細胞必須生活在等滲的環(huán)境中,,大多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞對滲透壓有一定耐受性,。研究顯示。
3)培養(yǎng)方法:將配制的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長,、寬,、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,用移液槍吸取帶有無菌水的無菌種子,,吹打在無菌濾紙上,,用無菌尖頭鑷子將種子均勻點播在培養(yǎng)基上;于溫度22-24℃,、濕度50-70%,、光照強度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照時間16h,、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng),。(4)1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)16d的幼苗,,表現(xiàn)為植株健壯,,蓮座葉均已伸展,葉色濃綠,,根系發(fā)達,、平均主根長為。如圖1所示。對比培養(yǎng)例1:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,,其余完全同培養(yǎng)實例1,,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,,培養(yǎng)16d的幼苗,,表現(xiàn)為植株健壯,蓮座葉部分伸展,,葉色濃綠,,根系發(fā)達、平均主根長為,。如圖1所示。培養(yǎng)實例1和對比培養(yǎng)例1的培養(yǎng)結(jié)果比較:哥倫比亞型擬南芥在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%,;在相同條件下培養(yǎng)16d時,,與1/2ms生長培養(yǎng)基相比,1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳,,主要表現(xiàn)為蓮座葉長勢更好,、根系更為發(fā)達。如圖1所示,。減血清培養(yǎng)基提高了細胞實驗的可靠性和重復(fù)性,。
按中華******典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測定法進行。滲透壓溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴散的現(xiàn)象稱為滲透,,阻止?jié)B透所需施加的壓力,,稱為滲透壓。細胞必須生活在等滲環(huán)境中,,動物細胞借助K+,、Na+維持滲透平衡。大多數(shù)細胞對滲透壓有一定的耐受性,。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細胞脫水萎縮,,培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細胞膨脹破裂,因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍,。按中華******典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進行,。**內(nèi)*****內(nèi)***是許多病原性**所產(chǎn)生的***。它的特殊性在于不是**或**的代謝產(chǎn)物,,而是**死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì),。培養(yǎng)基**內(nèi)***過高,對生物制品*苗(如狂犬,、乙肝*苗),、基因工程*品等注射用的*品都需要檢查**內(nèi)***。因此本項目的檢驗符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細胞培養(yǎng)基的**內(nèi)***標準定為<10EU/ml,。稱取本品規(guī)定量(見表4-12)的1/100,,加入**內(nèi)***檢查用水10mL溶解,吸取該溶液mL加**內(nèi)***檢查用水mL,,混勻即得試樣,。按中華******典2005年版二部附錄ⅪE**內(nèi)***檢查法中的凝膠法進行。微生物限度細胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品,,其中的微生物在一定條件下會吸收細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖,。RPMI1640培養(yǎng)基能夠提高細胞的存活率。寧夏基礎(chǔ)培養(yǎng)基產(chǎn)品介紹
MEM培養(yǎng)基在細胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性,。湖南F12培養(yǎng)基哪個好
所描述的實施例**是本申請一部分實施例,,而不是全部的實施例?;诒旧暾堉械膶嵤├?,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例,都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護的范圍,。實施例1一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基,,其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b;所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加,,然后間隔24h添加發(fā)酵培養(yǎng)基b,。所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,,k2hpo42g/l,,mgso4·7h2o50mg/l,2-羥基乙胺40mg/l,,cecl310mg/l,,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,,vb110mg/l,,生物素7μg/l;將各原料攪拌均勻后,,調(diào)節(jié)ph為,,121℃**15min,自然冷卻,,制得發(fā)酵培養(yǎng)基a,;所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸5g/l,尿素2g/l,,殼聚糖80mg/l,;將各原料攪拌均勻后,,調(diào)節(jié)ph為,121℃**15min,,自然冷卻,,制得發(fā)酵培養(yǎng)基b;采用常規(guī)發(fā)酵工藝:將黃色短桿菌gdk-9按8%接種量將種子液(od600nm為)接入裝有60l發(fā)酵培養(yǎng)基a的100l發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng),,發(fā)酵培養(yǎng)24h,,然后添加10l發(fā)酵培養(yǎng)基b,繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)24h,,收集發(fā)酵液,;整個發(fā)酵培養(yǎng)過程中,控制發(fā)酵溫度35℃,,通風(fēng)比1∶,,攪拌轉(zhuǎn)速300r/min,溶氧維持在20%,。湖南F12培養(yǎng)基哪個好