1、胰酶是,，就是說(shuō)PBS,注意,，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓,。2,、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整,。EDTA并不是必須的,，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重,。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA,。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心,。3,、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS,。4,、注意，血清可終止胰酶的作用,，但不能終止EDTA的作用,，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō),，終止消化后的離心是必要的。5,、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解,，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意,，胰酶可使溶液變酸,，所以要邊溶邊測(cè)pH，隨時(shí)調(diào)整,。注意,，不可加過(guò)量NaOH，否則過(guò)堿,，細(xì)胞會(huì)受不了,。6、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶,，可用磁力攪拌器,，或放入4度冰箱過(guò)夜，待溶解后過(guò)濾**,。7,、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器,，用的時(shí)候?qū)ι?*PBS即可,。8、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存,，使用液放在4度,，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效,，使用前放在室溫下一會(huì),。胰酶和胰蛋白酶不一樣，前者包括后者,。甘肅EDTA胰酶有哪些

胰蛋白酶（Trypsin）簡(jiǎn)稱胰酶,，是一種絲氨酸水解酶，能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷,。在組織細(xì)胞的提取,、培養(yǎng)，以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液,，用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì)，使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞,。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng),。常用胰酶工作濃度為0.25%,。EDTA可以螯合鈣鎂離子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解,，起到增強(qiáng)消化的效果,。酚紅是一種pH指示劑，溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色,，偏酸性時(shí)呈橘紅色,，近中性時(shí)呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,，含0.25%胰蛋白酶,，溶于Hank’s緩沖液，不含EDTA,，無(wú)酚紅指示劑,，經(jīng)0.22μm過(guò)濾除菌。甘肅EDTA胰酶有哪些胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運(yùn)輸。

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,，下面匯總一下胰酶使用過(guò)程中常見(jiàn)的一些問(wèn)題,。

胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液,。

胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年,。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱,。胰酶可分裝凍存,，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存,。胰酶使用的時(shí)候要注意什么,？（1）在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。（2）胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差,。

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液,。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,，EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞間的連接,，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞,。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性,、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),，在PH 8.0和37℃時(shí),，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時(shí),，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷,。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（0.05%）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,，因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用，以增強(qiáng)解離效果,。淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎,？

    ①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為,，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為,、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,，然后進(jìn)行真空過(guò)濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋,，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg,，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,，放入干燥器中冷卻至室溫,。然后稱取，加入10L異辛烷,，在攪拌下使其形成均勻的分散液,，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,，獲得濃度為,。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次,，，在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離,，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min，時(shí)間10-15min收集,、合并離心上層清液,，進(jìn)行反萃取，下層萃余液用于制備胰脂肪酶,。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，在攪拌下加入等體積的反萃取液進(jìn)行反萃取15-20min萃取液為0．。如此反萃取3次,，每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時(shí)間為15-20min,。分別收集,、合并離心上層清液和下層反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶,。 胰酶在PH值7.2-8.0的時(shí)候,，溶液呈淡紅色。青海EDTA胰酶進(jìn)口

胰蛋白酶消化液都由已經(jīng)過(guò)豬細(xì)小病毒檢測(cè)和支原體檢測(cè)的原料制備,。甘肅EDTA胰酶有哪些

對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾,，分裝，-20℃保存,，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫,，酶就變性了,。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中,，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2,，增加消化效力甘肅EDTA胰酶有哪些