乙二胺四乙酸:(EDTA)是一種有機(jī)化合物,,常溫常壓下為白色粉末。它是一種能與Mg2+,、Ca2+,、Mn2+、Fe2+等二價(jià)金屬離子結(jié)合的螯合劑,。動(dòng)物細(xì)胞在粘附的時(shí)候,,需要有Ca或Mg離子的參與,EDTA與他們結(jié)合后,,導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞粘附能力降低,,再加上胰蛋白酶的消化作用,,使得細(xì)胞與瓶壁快速脫離。兩者起到了協(xié)同消化的作用,。難消化的細(xì)胞,,胰酶中可填加EDTA。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,,因此使用時(shí)要甚重,。如果影響貼壁,但消化時(shí)必須要用,,那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,,可離心棄上清,再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),,可去除EDTA,。如果對(duì)貼壁沒影響,那么可不離心,。如果消化液中含有胰酶和EDTA,,好去除。中國香港EDTA胰酶介紹
胰酶消化貼璧細(xì)胞原理胰酶是一種重要的消化酶,,它在人體消化過程中起到了關(guān)鍵作用,。胰酶主要由胰腺分泌,它能夠幫助人體消化食物中的蛋白質(zhì),、脂肪和碳水化合物等營養(yǎng)物質(zhì),。而胰酶消化貼壁細(xì)胞則是指胰酶在消化過程中與腸道內(nèi)的貼壁細(xì)胞發(fā)生作用的機(jī)制。胰酶消化貼壁細(xì)胞的原理主要包括胰酶的合成,、分泌和作用三個(gè)過程首先是胰酶的合成,。胰酶是由胰腺內(nèi)的特殊細(xì)胞合成的。這些細(xì)胞受到胃內(nèi)食物的刺激后,,通過胰腺神經(jīng)末梢的刺激而開始合成和分泌胰酶,。合成的胰酶經(jīng)過胰管進(jìn)入小腸。接下來是胰酶的分泌,。胰酶的分泌主要通過胰腺分泌液的產(chǎn)生和排泄來實(shí)現(xiàn),。當(dāng)胃內(nèi)食物通過幽門進(jìn)入小腸后,小腸壁上的細(xì)胞會(huì)分泌一種叫做胃腺素的物質(zhì),,這種物質(zhì)能夠刺激胰腺分泌液的分泌,。胰腺分泌液中含有胰酶和其他消化酶,它們經(jīng)過胰管進(jìn)入小腸,,與食物中的營養(yǎng)物質(zhì)發(fā)生作用,。***是胰酶的作用。胰酶主要通過兩種方式作用于貼壁細(xì)胞,。一種方式是直接作用,,胰酶直接與貼壁細(xì)胞接觸并發(fā)揮作用,。另一種方式是間接作用,胰酶作用于食物中的營養(yǎng)物質(zhì),將其分解為小分子物質(zhì)后再與貼壁細(xì)胞發(fā)生作用,。 黑龍江進(jìn)口胰酶一般多少錢胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的,。
胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么?胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶,,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則,。因?yàn)槔鋬霰4鏁r(shí)體積會(huì)膨脹,多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性,。5,、怎么才能判斷胰酶消化完全?注意:不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了,。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,,只要能移動(dòng)了,多半呈沙狀移動(dòng)就可以了,,就應(yīng)該停止消化,。6、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化,?它的消化效果與哪些有關(guān)呢,?胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞,如胚胎,、上皮、肝,、腎等組織,,但對(duì)纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值,、溫度,、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān),。
胰酶和雙抗怎么保存,?
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雙抗的保存:雙抗通常情況下在-20°C保存一年,。由于該試劑在4°C下長期存放是不穩(wěn)定的,分裝后在-20°C下避光保存,。青霉素在2-8°C存放時(shí)間不應(yīng)超過4天,,鏈霉素相對(duì)穩(wěn)定一點(diǎn),在2-8°C可以存放30天左右,。雙抗從凍融后基本成分已開始降解,。胰酶的保存:胰酶可在-20°C下保存一年,。隨著時(shí)間延長,胰酶的消化能力減弱,。胰酶可分裝凍存,,在使用前從-20°C冰箱取出。盡量避免在4C長期保存,。 0.25%胰酶細(xì)胞消化液(含有EDTA,,含酚紅)消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長。
在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液)以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,,貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液,。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin),EDTA等,。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),,破壞細(xì)胞間的連接,,從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性,、胰酶濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在℃時(shí),,胰酶的作用能力**強(qiáng),,因此使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間,,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為,,而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度()的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化,。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,,因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用,,以增強(qiáng)解離效果。但是對(duì)于EDTA可能會(huì)干擾后續(xù)的測(cè)試分析時(shí),,推薦選擇不含EDTA的消化液,。本產(chǎn)品含有(Trypsin),溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,,經(jīng)過濾除菌,,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化。為改良型,除了具有方便快速,、穩(wěn)定安全,、細(xì)胞狀態(tài)好等特點(diǎn)之外,消化時(shí)間更短,,消化效果媲美進(jìn)口產(chǎn)品,,特別適用于難消化的細(xì)胞。 有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,。中國臺(tái)灣胰酶是什么
胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng),。中國香港EDTA胰酶介紹
胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過程它可以被看成一種簡單的動(dòng)力學(xué)過程,它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì),,然后這些留下的物質(zhì)可以用來維持細(xì)胞的高能量水平這種過程通過將脂肪,、蛋白質(zhì)、糖類和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來發(fā)生,。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子,,通常有四種類型,它們是肽酶,,脂水解酶,,載脂蛋白酶和糖水解酶,分別可以將蛋白質(zhì),、脂肪,、脂蛋白和糖類物質(zhì)分解為更小的離子和分子,以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì),,維持其自身的正常功能和形態(tài),。中國香港EDTA胰酶介紹